CAJ | 학술논문

目的Survivin是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员,在多数恶性肿瘤组织中丰富表达.因此,观察Survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响.方法设计合成针对Survivn mRNA特异性的ASODN,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测各组细胞增殖指数(proliferative index,PI)和凋亡指数(apoptotic index,AI),RT-PCR法分析转染后Survivn mRNA及Caspase-3 mRNA的变化,Western Blot法检测各组Survivn蛋白表达情况,荧光分光光度法测定Caspase-3的活性水平;MTT实验测定T24细胞对丝裂霉素(mitomycin,MMC)的敏感性.结果ASODN转染组透射电镜下观察到凋亡的征象,而各对照组未见凋亡证据;各转染组细胞AI明显高于各对照组,PI明显低于各对照组(P＜0.01),且在一定范围内呈量-效关系,各对照组间差异无显著性(P＞0.05);各转染组细胞Survivin mRNA、Survivin的表达较各对照组明显下调(P＜0.01),各对照组间差异无显著性(P＞0.05);Caspase-3 mRNA的表达在各组细胞间差异无显著性(P＞0.05);各转染组细胞Caspase-3活化水平较各对照组明显提高(P＜0.01),各对照组间差异无显著性(P＞0.05);MTT实验显示,转染组MMC半数抑制浓度(IC50)较对照组明显下降,ASODN可提高T24细胞对MMC的敏感性.结论Survivin ASODN转染T24细胞后可特异性封闭Survivin的表达,对Caspase-3 mRNA的表达无明显作用,能激活Caspase-3无活性前体,从而诱导T24细胞凋亡,抑制细胞增殖,提高T24细胞对化疗药物MMC的敏感性.
목적Survivin시근년래발현적조망억제단백가족신성원,재다수악성종류조직중봉부표체.인차,관찰Survivin반의과핵감산(ASODN)전염대인방광이행세포암T24세포조망、증식、세포대화료약물민감성적영향.방법설계합성침대Survivn mRNA특이성적ASODN,투사전경관찰세포형태변화,류식세포술검측각조세포증식지수(proliferative index,PI)화조망지수(apoptotic index,AI),RT-PCR법분석전염후Survivn mRNA급Caspase-3 mRNA적변화,Western Blot법검측각조Survivn단백표체정황,형광분광광도법측정Caspase-3적활성수평;MTT실험측정T24세포대사렬매소(mitomycin,MMC)적민감성.결과ASODN전염조투사전경하관찰도조망적정상,이각대조조미견조망증거;각전염조세포AI명현고우각대조조,PI명현저우각대조조(P＜0.01),차재일정범위내정량-효관계,각대조조간차이무현저성(P＞0.05);각전염조세포Survivin mRNA、Survivin적표체교각대조조명현하조(P＜0.01),각대조조간차이무현저성(P＞0.05);Caspase-3 mRNA적표체재각조세포간차이무현저성(P＞0.05);각전염조세포Caspase-3활화수평교각대조조명현제고(P＜0.01),각대조조간차이무현저성(P＞0.05);MTT실험현시,전염조MMC반수억제농도(IC50)교대조조명현하강,ASODN가제고T24세포대MMC적민감성.결론Survivin ASODN전염T24세포후가특이성봉폐Survivin적표체,대Caspase-3 mRNA적표체무명현작용,능격활Caspase-3무활성전체,종이유도T24세포조망,억제세포증식,제고T24세포대화료약물MMC적민감성.