生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
2期
209-213
,共5页
凌洁玉%刘朝%佟铁铸%樊惠英%张德坤%陈焕春%郭爱珍
凌潔玉%劉朝%佟鐵鑄%樊惠英%張德坤%陳煥春%郭愛珍
릉길옥%류조%동철주%번혜영%장덕곤%진환춘%곽애진
山羊C3d%口蹄疫病毒VP1基因%分子佐剂%真核表达
山羊C3d%口蹄疫病毒VP1基因%分子佐劑%真覈錶達
산양C3d%구제역병독VP1기인%분자좌제%진핵표체
旨在构建含分子佐剂山羊补体C3d基因的O型口蹄疫病毒VP1基因真核表达质粒.克隆山羊C3d基因,通过linker(G4S)2将3拷贝C3d基因串联;克隆羊源O型口蹄疫病毒VP1基因,通过 linker(G4S)2与3拷贝 C3d 基因相连,构建重组质粒 pUC19-VP1-C3d3.将 VP1-C3d3融合基因亚克隆入含有分泌表达信号肽tPA序列的 pcDNA3.1(+)CMV 启动子下游,构建重组真核表达质粒 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3.在脂质体介导下,将 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3转染 HeLa 细胞.间接免疫荧光分析表明,VP1- C3d3 在 HeLa 细胞中获得了瞬时表达,Western blot 分析证实转染的阳性细胞能分泌预期大小(133 kD)的融合蛋白.重组质粒 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3 为研制以羊补体 C3d 为分子佐剂的口蹄疫新型疫苗奠定了基础.
旨在構建含分子佐劑山羊補體C3d基因的O型口蹄疫病毒VP1基因真覈錶達質粒.剋隆山羊C3d基因,通過linker(G4S)2將3拷貝C3d基因串聯;剋隆羊源O型口蹄疫病毒VP1基因,通過 linker(G4S)2與3拷貝 C3d 基因相連,構建重組質粒 pUC19-VP1-C3d3.將 VP1-C3d3融閤基因亞剋隆入含有分泌錶達信號肽tPA序列的 pcDNA3.1(+)CMV 啟動子下遊,構建重組真覈錶達質粒 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3.在脂質體介導下,將 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3轉染 HeLa 細胞.間接免疫熒光分析錶明,VP1- C3d3 在 HeLa 細胞中穫得瞭瞬時錶達,Western blot 分析證實轉染的暘性細胞能分泌預期大小(133 kD)的融閤蛋白.重組質粒 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3 為研製以羊補體 C3d 為分子佐劑的口蹄疫新型疫苗奠定瞭基礎.
지재구건함분자좌제산양보체C3d기인적O형구제역병독VP1기인진핵표체질립.극륭산양C3d기인,통과linker(G4S)2장3고패C3d기인천련;극륭양원O형구제역병독VP1기인,통과 linker(G4S)2여3고패 C3d 기인상련,구건중조질립 pUC19-VP1-C3d3.장 VP1-C3d3융합기인아극륭입함유분비표체신호태tPA서렬적 pcDNA3.1(+)CMV 계동자하유,구건중조진핵표체질립 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3.재지질체개도하,장 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3전염 HeLa 세포.간접면역형광분석표명,VP1- C3d3 재 HeLa 세포중획득료순시표체,Western blot 분석증실전염적양성세포능분비예기대소(133 kD)적융합단백.중조질립 pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3 위연제이양보체 C3d 위분자좌제적구제역신형역묘전정료기출.
