温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2008年
2期
106-109
,共4页
张德意%朱冠保%张丽芳%朱珊丽%陈俊
張德意%硃冠保%張麗芳%硃珊麗%陳俊
장덕의%주관보%장려방%주산려%진준
乳头状瘤病毒%癌胚抗原%原核表达%T淋巴细胞,细胞毒性
乳頭狀瘤病毒%癌胚抗原%原覈錶達%T淋巴細胞,細胞毒性
유두상류병독%암배항원%원핵표체%T림파세포,세포독성
目的:构建人乳头瘤病毒(HPv)16型衣壳蛋白L1与癌胚抗原(CEA)细胞毒T细胞(CTL)表位嵌合基因,探讨其在原核表达系统中的表达情况.方法:选择CEA CTL表位(CEA691 IMIGVLVGV),以HPVl6阳性宫颈癌组织提取的DNA为模板,通过PCR方法扩增出HPVl6 LI/CEA CTL表位嵌合基因,克隆入pET32a(+)表达载体,转化大肠杆茵BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化,进一步采用SDS.PAGE和Western-blot分析鉴定.结果:pET32a(+)/HPVl6 L1/cEA CTL表位重组质粒构建成功,并在大肠杆菌中得到表达.SDS·PAGE分析表明表达产物分子质量(Mr)约为83 X 10.,与预期相符,Western-blot方法进一步证实其为目的蛋白.结论:利用pET32a(+)表达载体能表达HPVl6 L1/cEA CTL表位重组蛋白,为其进一步的免疫效应研究打下了基础.
目的:構建人乳頭瘤病毒(HPv)16型衣殼蛋白L1與癌胚抗原(CEA)細胞毒T細胞(CTL)錶位嵌閤基因,探討其在原覈錶達繫統中的錶達情況.方法:選擇CEA CTL錶位(CEA691 IMIGVLVGV),以HPVl6暘性宮頸癌組織提取的DNA為模闆,通過PCR方法擴增齣HPVl6 LI/CEA CTL錶位嵌閤基因,剋隆入pET32a(+)錶達載體,轉化大腸桿茵BL21(DE3),經IPTG誘導錶達融閤蛋白,通過Ni-NAT離子交換柱層析純化,進一步採用SDS.PAGE和Western-blot分析鑒定.結果:pET32a(+)/HPVl6 L1/cEA CTL錶位重組質粒構建成功,併在大腸桿菌中得到錶達.SDS·PAGE分析錶明錶達產物分子質量(Mr)約為83 X 10.,與預期相符,Western-blot方法進一步證實其為目的蛋白.結論:利用pET32a(+)錶達載體能錶達HPVl6 L1/cEA CTL錶位重組蛋白,為其進一步的免疫效應研究打下瞭基礎.
목적:구건인유두류병독(HPv)16형의각단백L1여암배항원(CEA)세포독T세포(CTL)표위감합기인,탐토기재원핵표체계통중적표체정황.방법:선택CEA CTL표위(CEA691 IMIGVLVGV),이HPVl6양성궁경암조직제취적DNA위모판,통과PCR방법확증출HPVl6 LI/CEA CTL표위감합기인,극륭입pET32a(+)표체재체,전화대장간인BL21(DE3),경IPTG유도표체융합단백,통과Ni-NAT리자교환주층석순화,진일보채용SDS.PAGE화Western-blot분석감정.결과:pET32a(+)/HPVl6 L1/cEA CTL표위중조질립구건성공,병재대장간균중득도표체.SDS·PAGE분석표명표체산물분자질량(Mr)약위83 X 10.,여예기상부,Western-blot방법진일보증실기위목적단백.결론:이용pET32a(+)표체재체능표체HPVl6 L1/cEA CTL표위중조단백,위기진일보적면역효응연구타하료기출.
