重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2011年
3期
270-273
,共4页
人工锌指蛋白%真核表达载体%COS-7细胞
人工鋅指蛋白%真覈錶達載體%COS-7細胞
인공자지단백%진핵표체재체%COS-7세포
目的:构建人工锌指蛋白(Putative zinc finger protein,ZFP)基因的真核表达载体,验证其在真核细胞内的表达情况,为进一步构建人工转录因子(Artificial transcription domain factor,ATF)所需的DNA结合结构域寻找合适的ZFP.方法:合成ZFP的全基因核酸序列并载入pEGFP-N1真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pEGFP-N1/ZFP-Flag,通过菌液PCR、酶切和测序来鉴定重组质粒的正确性.脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒转染于COS-7细胞中,使用RT-PCR、荧光显微镜、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达.结果:成功构建了pEGFP-N1/ZFP及pEGFP-N1/ZFP-Flag重组质粒,并且在COS-7细胞中进行了ZFP的表达.结论:通过生物信息学工具获取的ZFP氨基酸序列,经过密码子优化得到的基因序列能够在真核细胞内成功表达.
目的:構建人工鋅指蛋白(Putative zinc finger protein,ZFP)基因的真覈錶達載體,驗證其在真覈細胞內的錶達情況,為進一步構建人工轉錄因子(Artificial transcription domain factor,ATF)所需的DNA結閤結構域尋找閤適的ZFP.方法:閤成ZFP的全基因覈痠序列併載入pEGFP-N1真覈錶達載體中,構建重組質粒pEGFP-N1/ZFP及pEGFP-N1/ZFP-Flag,通過菌液PCR、酶切和測序來鑒定重組質粒的正確性.脂質體Lipofectamine 2000將重組質粒轉染于COS-7細胞中,使用RT-PCR、熒光顯微鏡、Western blot方法鑒定ZFP在該細胞中的錶達.結果:成功構建瞭pEGFP-N1/ZFP及pEGFP-N1/ZFP-Flag重組質粒,併且在COS-7細胞中進行瞭ZFP的錶達.結論:通過生物信息學工具穫取的ZFP氨基痠序列,經過密碼子優化得到的基因序列能夠在真覈細胞內成功錶達.
목적:구건인공자지단백(Putative zinc finger protein,ZFP)기인적진핵표체재체,험증기재진핵세포내적표체정황,위진일보구건인공전록인자(Artificial transcription domain factor,ATF)소수적DNA결합결구역심조합괄적ZFP.방법:합성ZFP적전기인핵산서렬병재입pEGFP-N1진핵표체재체중,구건중조질립pEGFP-N1/ZFP급pEGFP-N1/ZFP-Flag,통과균액PCR、매절화측서래감정중조질립적정학성.지질체Lipofectamine 2000장중조질립전염우COS-7세포중,사용RT-PCR、형광현미경、Western blot방법감정ZFP재해세포중적표체.결과:성공구건료pEGFP-N1/ZFP급pEGFP-N1/ZFP-Flag중조질립,병차재COS-7세포중진행료ZFP적표체.결론:통과생물신식학공구획취적ZFP안기산서렬,경과밀마자우화득도적기인서렬능구재진핵세포내성공표체.
