CAJ | 학술논문

目的:以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azacytidine,5-Zac)对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1(programmed death receptor 1,PD-1)基因启动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系.方法:以不同浓度的5-Zac分组(0 μmol/L组、5μmol/L组、10 μmol/L组)作用于体外培养的Molt-4细胞72 h,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞表面表达PD-1的Molt-4细胞比例和细胞凋亡率；反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测5-Zac作用后PD-1基因mRNA的转录水平；亚硫酸氢钠处理各组Molt-4细胞DNA,PCR扩增PD-1启动子基因片段,转化感受态大肠杆菌,挑克隆测序,检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态.结果:0μmol/L组、5μmol/L组、10 μmol/L组的5-Zac作用于Molt-4细胞72 h后,PD-1在细胞表面的表达率分别为(1.13±0.01)％,(18.96±1.87)％和(63.09±6.25)％,并呈现浓度依赖性；PD-1基因mRNA表达量显著增加；细胞凋亡检测结果显示:与0μmol/L组相比,5μmol/L组、10 μmol/L组5 -Zac处理72 h后Molt-4细胞的凋亡率显著增加,0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组凋亡率分别为(1.9±0.06)％,(8.98±1.36)％和(24.5±3.68)％,差异有统计学意义(P＜0.01)；上述3组DNA亚硫酸氢钠测序结果表明:加入甲基化抑制剂5 -Zac处理后,PD-1启动子上-601 bp和-553 bp CpG点去甲基化程度明显增高.结论:甲基化抑制剂5 -Zac可导致体外培养的T淋巴细胞系Molt-4细胞表面PD-1 mRNA表达显著增加,细胞凋亡率增高,这种增高可能与PD-1基因启动子区域出现的去甲基化有关.
목적:이T림파세포주Molt-4세포위모형,탐토갑기화억제제5-잡담포감(5-azacytidine,5-Zac)대림파세포표면정서성사망수체-1(programmed death receptor 1,PD-1)기인계동자적거갑기화작용급기유도적PD-1기인표체적개변,병진일보연구거갑기화작용여PD-1기인표체지간적관계.방법:이불동농도적5-Zac분조(0 μmol/L조、5μmol/L조、10 μmol/L조)작용우체외배양적Molt-4세포72 h,류식세포의(flow cytometry,FCM)검측세포표면표체PD-1적Molt-4세포비례화세포조망솔；반전록-취합매련반응(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)검측5-Zac작용후PD-1기인mRNA적전록수평；아류산경납처리각조Molt-4세포DNA,PCR확증PD-1계동자기인편단,전화감수태대장간균,도극륭측서,검측확증적PD-1계동자편단갑기화상태.결과:0μmol/L조、5μmol/L조、10 μmol/L조적5-Zac작용우Molt-4세포72 h후,PD-1재세포표면적표체솔분별위(1.13±0.01)％,(18.96±1.87)％화(63.09±6.25)％,병정현농도의뢰성；PD-1기인mRNA표체량현저증가；세포조망검측결과현시:여0μmol/L조상비,5μmol/L조、10 μmol/L조5 -Zac처리72 h후Molt-4세포적조망솔현저증가,0μmol/L조、5μmol/L조、10μmol/L조조망솔분별위(1.9±0.06)％,(8.98±1.36)％화(24.5±3.68)％,차이유통계학의의(P＜0.01)；상술3조DNA아류산경납측서결과표명:가입갑기화억제제5 -Zac처리후,PD-1계동자상-601 bp화-553 bp CpG점거갑기화정도명현증고.결론:갑기화억제제5 -Zac가도치체외배양적T림파세포계Molt-4세포표면PD-1 mRNA표체현저증가,세포조망솔증고,저충증고가능여PD-1기인계동자구역출현적거갑기화유관.