解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
2期
220-224
,共5页
覃红斌%张玲%魏蕾%张京伟
覃紅斌%張玲%魏蕾%張京偉
담홍빈%장령%위뢰%장경위
乳腺癌%血清和糖皮质激素调节蛋白激酶%β-catenin%RNA干扰%免疫印迹法
乳腺癌%血清和糖皮質激素調節蛋白激酶%β-catenin%RNA榦擾%免疫印跡法
유선암%혈청화당피질격소조절단백격매%β-catenin%RNA간우%면역인적법
目的 建立稳定抑制血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)表达的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,观察SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生物学特性的影响. 方法 构建针对SGK1的shRNA干扰质粒pGen -3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control.转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经G418筛选得到稳定抑制SGK1表达的乳腺癌细胞模型；实时定量PCR、免疫荧光以及Western blotting检测shRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达；四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞体外生长能力；体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组癌细胞的侵袭和转移.结果 成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立了稳定抑制SGK1表达的乳腺癌细胞模型；与阴性对照组和未转染组相比,肿瘤细胞中SGK1的表达水平显著降低(P＜0.01)；SGK1基因沉默后,人乳腺癌细胞的生长能力、浸润和迁移能力均明显降低(P＜0.05).实验中还发现抑制SGK1基因表达之后,β-catenin的含量也出现明显下降.结论 抑制SGK1基因的表达可以显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长,并降低其侵袭转移的能力,其中β-catenin参与了SGK1基因的抑制功能.
目的 建立穩定抑製血清和糖皮質激素調節蛋白激酶1(SGK1)錶達的人乳腺癌細胞繫MDA-MB-231,觀察SGK1基因沉默對人乳腺癌細胞生物學特性的影響. 方法 構建針對SGK1的shRNA榦擾質粒pGen -3-siSGK1和陰性對照質粒pGen-3-control.轉染人乳腺癌細胞繫MDA-MB-231,經G418篩選得到穩定抑製SGK1錶達的乳腺癌細胞模型；實時定量PCR、免疫熒光以及Western blotting檢測shRNA榦擾組、陰性對照組及未轉染組細胞中SGK1的錶達；四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測細胞體外生長能力；體外浸潤實驗、細胞遷移實驗檢測各組癌細胞的侵襲和轉移.結果 成功構建針對SGK1基因的shRNA榦擾質粒,建立瞭穩定抑製SGK1錶達的乳腺癌細胞模型；與陰性對照組和未轉染組相比,腫瘤細胞中SGK1的錶達水平顯著降低(P＜0.01)；SGK1基因沉默後,人乳腺癌細胞的生長能力、浸潤和遷移能力均明顯降低(P＜0.05).實驗中還髮現抑製SGK1基因錶達之後,β-catenin的含量也齣現明顯下降.結論 抑製SGK1基因的錶達可以顯著抑製人乳腺癌細胞MDA-MB-231的生長,併降低其侵襲轉移的能力,其中β-catenin參與瞭SGK1基因的抑製功能.
목적 건립은정억제혈청화당피질격소조절단백격매1(SGK1)표체적인유선암세포계MDA-MB-231,관찰SGK1기인침묵대인유선암세포생물학특성적영향. 방법 구건침대SGK1적shRNA간우질립pGen -3-siSGK1화음성대조질립pGen-3-control.전염인유선암세포계MDA-MB-231,경G418사선득도은정억제SGK1표체적유선암세포모형；실시정량PCR、면역형광이급Western blotting검측shRNA간우조、음성대조조급미전염조세포중SGK1적표체；사갑기우담서염(MTT)비색법검측세포체외생장능력；체외침윤실험、세포천이실험검측각조암세포적침습화전이.결과 성공구건침대SGK1기인적shRNA간우질립,건립료은정억제SGK1표체적유선암세포모형；여음성대조조화미전염조상비,종류세포중SGK1적표체수평현저강저(P＜0.01)；SGK1기인침묵후,인유선암세포적생장능력、침윤화천이능력균명현강저(P＜0.05).실험중환발현억제SGK1기인표체지후,β-catenin적함량야출현명현하강.결론 억제SGK1기인적표체가이현저억제인유선암세포MDA-MB-231적생장,병강저기침습전이적능력,기중β-catenin삼여료SGK1기인적억제공능.
