中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2002年
4期
233-235
,共3页
可溶性成纤维细胞生长因子受体1%酵母表达系统%表达
可溶性成纖維細胞生長因子受體1%酵母錶達繫統%錶達
가용성성섬유세포생장인자수체1%효모표체계통%표체
目的:表达重组人可溶性成纤维细胞生长因子受体1(solublefibroblast growth factor receptorl,sFGFR1),研究其对成纤维细胞生长因子(FGF)生物学活性的拮抗作用.方法:采用逆转录-PCR(FT-PCR)技术自人肺成纤维细胞获得sFGFR1 cDNA,测序确证后,将其克隆入酵母细胞表达载体pYEX4T-1;重组质粒转化入酵母细胞(DY150)中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westerm blot鉴定.利用NIH3T3细胞增殖抑制实验检测重组人sFGFR1的生物学活性.结果:经CuS04诱导,酵母细胞表达出重组谷胱苷肽转移酶(GST)-sFGFR1融合蛋白,此蛋白在凝胶上表现为1条约60 KD 的阳性区带,在Western blot实验中可被GST特异性抗体识别.重组GST-sFGFR1融合蛋白的粗提物在体外能够拮抗FGF介导的促NIH3T3细胞增殖的活性.结论:重组GST-sFGFR1融合蛋白在酵母表达系统中得到有效表达,并具有很好的生物活性.
目的:錶達重組人可溶性成纖維細胞生長因子受體1(solublefibroblast growth factor receptorl,sFGFR1),研究其對成纖維細胞生長因子(FGF)生物學活性的拮抗作用.方法:採用逆轉錄-PCR(FT-PCR)技術自人肺成纖維細胞穫得sFGFR1 cDNA,測序確證後,將其剋隆入酵母細胞錶達載體pYEX4T-1;重組質粒轉化入酵母細胞(DY150)中進行誘導錶達,錶達產物經SDS-PAGE及Westerm blot鑒定.利用NIH3T3細胞增殖抑製實驗檢測重組人sFGFR1的生物學活性.結果:經CuS04誘導,酵母細胞錶達齣重組穀胱苷肽轉移酶(GST)-sFGFR1融閤蛋白,此蛋白在凝膠上錶現為1條約60 KD 的暘性區帶,在Western blot實驗中可被GST特異性抗體識彆.重組GST-sFGFR1融閤蛋白的粗提物在體外能夠拮抗FGF介導的促NIH3T3細胞增殖的活性.結論:重組GST-sFGFR1融閤蛋白在酵母錶達繫統中得到有效錶達,併具有很好的生物活性.
목적:표체중조인가용성성섬유세포생장인자수체1(solublefibroblast growth factor receptorl,sFGFR1),연구기대성섬유세포생장인자(FGF)생물학활성적길항작용.방법:채용역전록-PCR(FT-PCR)기술자인폐성섬유세포획득sFGFR1 cDNA,측서학증후,장기극륭입효모세포표체재체pYEX4T-1;중조질립전화입효모세포(DY150)중진행유도표체,표체산물경SDS-PAGE급Westerm blot감정.이용NIH3T3세포증식억제실험검측중조인sFGFR1적생물학활성.결과:경CuS04유도,효모세포표체출중조곡광감태전이매(GST)-sFGFR1융합단백,차단백재응효상표현위1조약60 KD 적양성구대,재Western blot실험중가피GST특이성항체식별.중조GST-sFGFR1융합단백적조제물재체외능구길항FGF개도적촉NIH3T3세포증식적활성.결론:중조GST-sFGFR1융합단백재효모표체계통중득도유효표체,병구유흔호적생물활성.
