中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2004年
3期
245-247
,共3页
高丰%金天明%喻华英%周学章%邓旭明%阎继业
高豐%金天明%喻華英%週學章%鄧旭明%閻繼業
고봉%금천명%유화영%주학장%산욱명%염계업
巴氏杆菌%StrA基因%克隆%原核表达
巴氏桿菌%StrA基因%剋隆%原覈錶達
파씨간균%StrA기인%극륭%원핵표체
根据巴氏杆菌链霉素耐药基因StrA序列,设计合成1对引物,以临床分离的禽源巴氏杆菌链霉素耐药菌株质粒DNA为模板,通过PCR技术,扩增出禽源巴氏杆菌的StrA基因片段.将长约804 bp的StrA目的基因克隆到pGEM-T载体上,通过核苷酸序列测定,结果表明,克隆的StrA基因长约804 bp,与文献报道(NC-001774)的同源性为99.8%,只有1个碱基不同(69位T→C),但所编码的氨基酸没有改变.将StrA基因按正确的阅读框架定向克隆到原核表达载体pET-28c(+)中,重组质粒酶切鉴定正确后,将构建好的原核表达质粒pET-28c(+)-StrA转化到受体茵BL-21(DE3)中,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳,经检测,StrA外源基因的表达产物占菌体总蛋白的12%.蛋白表达形式为包涵体表达.
根據巴氏桿菌鏈黴素耐藥基因StrA序列,設計閤成1對引物,以臨床分離的禽源巴氏桿菌鏈黴素耐藥菌株質粒DNA為模闆,通過PCR技術,擴增齣禽源巴氏桿菌的StrA基因片段.將長約804 bp的StrA目的基因剋隆到pGEM-T載體上,通過覈苷痠序列測定,結果錶明,剋隆的StrA基因長約804 bp,與文獻報道(NC-001774)的同源性為99.8%,隻有1箇堿基不同(69位T→C),但所編碼的氨基痠沒有改變.將StrA基因按正確的閱讀框架定嚮剋隆到原覈錶達載體pET-28c(+)中,重組質粒酶切鑒定正確後,將構建好的原覈錶達質粒pET-28c(+)-StrA轉化到受體茵BL-21(DE3)中,經IPTG誘導後,進行SDS-PAGE電泳,經檢測,StrA外源基因的錶達產物佔菌體總蛋白的12%.蛋白錶達形式為包涵體錶達.
근거파씨간균련매소내약기인StrA서렬,설계합성1대인물,이림상분리적금원파씨간균련매소내약균주질립DNA위모판,통과PCR기술,확증출금원파씨간균적StrA기인편단.장장약804 bp적StrA목적기인극륭도pGEM-T재체상,통과핵감산서렬측정,결과표명,극륭적StrA기인장약804 bp,여문헌보도(NC-001774)적동원성위99.8%,지유1개감기불동(69위T→C),단소편마적안기산몰유개변.장StrA기인안정학적열독광가정향극륭도원핵표체재체pET-28c(+)중,중조질립매절감정정학후,장구건호적원핵표체질립pET-28c(+)-StrA전화도수체인BL-21(DE3)중,경IPTG유도후,진행SDS-PAGE전영,경검측,StrA외원기인적표체산물점균체총단백적12%.단백표체형식위포함체표체.
