中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2005年
34期
4-7
,共4页
王晓军%王爱民%张忠荣%吴思宇%郭庆山%贺伟峰%汤守营%张全顺
王曉軍%王愛民%張忠榮%吳思宇%郭慶山%賀偉峰%湯守營%張全順
왕효군%왕애민%장충영%오사우%곽경산%하위봉%탕수영%장전순
腺病毒科%基因疗法%大鼠
腺病毒科%基因療法%大鼠
선병독과%기인요법%대서
目的:构建人骨保护素基因的重组腺病毒载体,并观察在大鼠骨髓基质细胞中的转染能力及表达效率.方法:实验于2004-03/2005-04在第三军医大学完成.采用基因工程技术,将人骨保护素基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-巨细胞病毒上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带人骨保护素基因的重组腺病毒,将携带人骨保护素基因重组腺病毒对大鼠骨髓基质细胞进行感染.采用聚合酶链反应方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度,应用Western blot及酶联免疫吸附法检测骨保护素在大鼠骨髓基质细胞中的表达.结果:①酶切鉴定及聚合酶链反应结果证明人骨保护素基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度可达2.5×109pfu/mL,具有很强感染能力.②人骨保护素基因重组腺病毒载体转染大鼠骨髓基质细胞后48 h,Western blot及酶联免疫吸附法可检测到人骨保护素的蛋白表达.结论:应用细菌内同源重组法,可成功构建含人骨保护素基因重组腺病毒载体,且能高效转染大鼠骨髓基质细胞.
目的:構建人骨保護素基因的重組腺病毒載體,併觀察在大鼠骨髓基質細胞中的轉染能力及錶達效率.方法:實驗于2004-03/2005-04在第三軍醫大學完成.採用基因工程技術,將人骨保護素基因片段插入到腺病毒載體質粒pAdTrack-巨細胞病毒上,利用PadEasy繫統與骨架質粒在大腸桿菌BJ5183胞內進行同源重組,經293細胞包裝、擴增,得到攜帶人骨保護素基因的重組腺病毒,將攜帶人骨保護素基因重組腺病毒對大鼠骨髓基質細胞進行感染.採用聚閤酶鏈反應方法對重組腺病毒載體進行鑒定,利用綠色熒光報告基因轉染結果,以熒光計數法檢測重組腺病毒的滴度,應用Western blot及酶聯免疫吸附法檢測骨保護素在大鼠骨髓基質細胞中的錶達.結果:①酶切鑒定及聚閤酶鏈反應結果證明人骨保護素基因重組腺病毒載體構建成功,病毒滴度可達2.5×109pfu/mL,具有很彊感染能力.②人骨保護素基因重組腺病毒載體轉染大鼠骨髓基質細胞後48 h,Western blot及酶聯免疫吸附法可檢測到人骨保護素的蛋白錶達.結論:應用細菌內同源重組法,可成功構建含人骨保護素基因重組腺病毒載體,且能高效轉染大鼠骨髓基質細胞.
목적:구건인골보호소기인적중조선병독재체,병관찰재대서골수기질세포중적전염능력급표체효솔.방법:실험우2004-03/2005-04재제삼군의대학완성.채용기인공정기술,장인골보호소기인편단삽입도선병독재체질립pAdTrack-거세포병독상,이용PadEasy계통여골가질립재대장간균BJ5183포내진행동원중조,경293세포포장、확증,득도휴대인골보호소기인적중조선병독,장휴대인골보호소기인중조선병독대대서골수기질세포진행감염.채용취합매련반응방법대중조선병독재체진행감정,이용록색형광보고기인전염결과,이형광계수법검측중조선병독적적도,응용Western blot급매련면역흡부법검측골보호소재대서골수기질세포중적표체.결과:①매절감정급취합매련반응결과증명인골보호소기인중조선병독재체구건성공,병독적도가체2.5×109pfu/mL,구유흔강감염능력.②인골보호소기인중조선병독재체전염대서골수기질세포후48 h,Western blot급매련면역흡부법가검측도인골보호소적단백표체.결론:응용세균내동원중조법,가성공구건함인골보호소기인중조선병독재체,차능고효전염대서골수기질세포.
