生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
6-10
,共5页
蔺日胜%王和平%周平%武翠%包晓兰%赵丽霞
藺日勝%王和平%週平%武翠%包曉蘭%趙麗霞
린일성%왕화평%주평%무취%포효란%조려하
酵母菌%25SrDNA%整合诱导型表达载体%表达%β-甘露聚糖酶
酵母菌%25SrDNA%整閤誘導型錶達載體%錶達%β-甘露聚糖酶
효모균%25SrDNA%정합유도형표체재체%표체%β-감로취당매
目的:实现β-甘露聚糖酶基因在野生酵母菌中的整合诱导型表达.方法:克隆猪肠道野生酵母菌JSY4的25S rDNA片段;并与VIP5经EcoRⅠ与BamH Ⅰ双酶切连接,构建载体YIP5-rDNA.BamHⅠ与Sal Ⅰ双酶切YIP5-rDNA,EcoR Ⅰ与Sal Ⅰ双酶切pGEM-Man Ⅰ得到Man Ⅰ基因,Bgl Ⅱ与EcoR Ⅰ双酶切pPIC9K得到AOX1启动子,将三个片段连接,构建高拷贝整合诱导型表达载体VIP5-rDNA-AOX1-Man Ⅰ.提取DNA用Sal Ⅰ单酶切线性化与pAX15按3∶1的比例共转化JSY4,在含300μg/ml G418的YEPD平板上筛选工程菌转化子,PCR方法鉴定.用2%甲醇诱导共转化工程菌以实现表达.结果:成功表达出β-甘露聚糖酶,其比活力为0.90IU/ml.而且传代10次后仍能检测到Man Ⅰ基因的表达产物β-甘露聚糖酶.结论:实现了β-甘露聚糖酶基因随共转化工程菌染色体稳定遗传及表达的目的.
目的:實現β-甘露聚糖酶基因在野生酵母菌中的整閤誘導型錶達.方法:剋隆豬腸道野生酵母菌JSY4的25S rDNA片段;併與VIP5經EcoRⅠ與BamH Ⅰ雙酶切連接,構建載體YIP5-rDNA.BamHⅠ與Sal Ⅰ雙酶切YIP5-rDNA,EcoR Ⅰ與Sal Ⅰ雙酶切pGEM-Man Ⅰ得到Man Ⅰ基因,Bgl Ⅱ與EcoR Ⅰ雙酶切pPIC9K得到AOX1啟動子,將三箇片段連接,構建高拷貝整閤誘導型錶達載體VIP5-rDNA-AOX1-Man Ⅰ.提取DNA用Sal Ⅰ單酶切線性化與pAX15按3∶1的比例共轉化JSY4,在含300μg/ml G418的YEPD平闆上篩選工程菌轉化子,PCR方法鑒定.用2%甲醇誘導共轉化工程菌以實現錶達.結果:成功錶達齣β-甘露聚糖酶,其比活力為0.90IU/ml.而且傳代10次後仍能檢測到Man Ⅰ基因的錶達產物β-甘露聚糖酶.結論:實現瞭β-甘露聚糖酶基因隨共轉化工程菌染色體穩定遺傳及錶達的目的.
목적:실현β-감로취당매기인재야생효모균중적정합유도형표체.방법:극륭저장도야생효모균JSY4적25S rDNA편단;병여VIP5경EcoRⅠ여BamH Ⅰ쌍매절련접,구건재체YIP5-rDNA.BamHⅠ여Sal Ⅰ쌍매절YIP5-rDNA,EcoR Ⅰ여Sal Ⅰ쌍매절pGEM-Man Ⅰ득도Man Ⅰ기인,Bgl Ⅱ여EcoR Ⅰ쌍매절pPIC9K득도AOX1계동자,장삼개편단련접,구건고고패정합유도형표체재체VIP5-rDNA-AOX1-Man Ⅰ.제취DNA용Sal Ⅰ단매절선성화여pAX15안3∶1적비례공전화JSY4,재함300μg/ml G418적YEPD평판상사선공정균전화자,PCR방법감정.용2%갑순유도공전화공정균이실현표체.결과:성공표체출β-감로취당매,기비활력위0.90IU/ml.이차전대10차후잉능검측도Man Ⅰ기인적표체산물β-감로취당매.결론:실현료β-감로취당매기인수공전화공정균염색체은정유전급표체적목적.
