CAJ | 학술논문

根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力相关基因E9的序列,设计并合成了1对特异性引物,以IMT5155菌株的基因组DNA为模板扩增了E9基因所在ORF的部分序列.将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)载体中,构建了原核表达质粒pET-28a-E9,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫半乳糖苷(IPTG)诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(32.2 ku).Western-blot分析表明,该融合蛋白具有免疫反应性.对重组蛋白进行纯化后免疫动物进行抗体效价测定,进一步分析重组蛋白的相关生物学功能,分别进行了细胞毒性试验、动物试验、细胞黏附与黏附影响试验.结果表明,该蛋白没有细胞毒性,对小鼠亦无毒性,有一定的黏附作用.
근거금치병성대장간균IMT5155독력상관기인E9적서렬,설계병합성료1대특이성인물,이IMT5155균주적기인조DNA위모판확증료E9기인소재ORF적부분서렬.장PCR산물진행료T/A극륭,전화대장간균,감정성공획득목적편단후,장기정향아극륭도pET-28a(+)재체중,구건료원핵표체질립pET-28a-E9,병장기전화지대장간균BL21(DE3)감수태세포중,경1 mmol/L이병기-β-D-류반유당감(IPTG)유도화SDS-PAGE분석,출현료여예기목적단백일치적외원단백대(32.2 ku).Western-blot분석표명,해융합단백구유면역반응성.대중조단백진행순화후면역동물진행항체효개측정,진일보분석중조단백적상관생물학공능,분별진행료세포독성시험、동물시험、세포점부여점부영향시험.결과표명,해단백몰유세포독성,대소서역무독성,유일정적점부작용.