CAJ | 학술논문

从水稻花序分生组织总RNA中逆转录扩增总cDNA,PCR扩增OsCKX2基因中设计的目的片段,将纯化的目的片段克隆到pMD19-T Simple载体中,PCR鉴定并测序分析,制备成荧光定量PCR梯度浓度质粒标准品.对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验.标准曲线结果表明,建立的OsCKX2基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,特异性好,灵敏度高,可达102拷贝;线性范围广,可达1.0×102～1.0×107拷贝;扩增效率高(E=95.9%);稳定性、重复性好,可靠性高,批内和批间变异系数(CV)仅为:0.14%～0.29%和0.16%～0.35%;循环阈值与PCR 体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r＝1.000),可对OsCKX2基因表达进行准确实时定量.一个基于TaqMan 实时荧光定量RT-PCR技术,定量分析控制水稻谷粒数关键基因之一OsCKX2转录水平的技术体系被成功建立.该技术体系重组质粒标准品的制备方法具有很强的实用性;对基因OsCKX2的表达实时定量准确、可靠、便捷.
종수도화서분생조직총RNA중역전록확증총cDNA,PCR확증OsCKX2기인중설계적목적편단,장순화적목적편단극륭도pMD19-T Simple재체중,PCR감정병측서분석,제비성형광정량PCR제도농도질립표준품.대중조질립진행실시형광정량PCR실험.표준곡선결과표명,건립적OsCKX2기인mRNA표체실시형광정량PCR검측방법,특이성호,령민도고,가체102고패;선성범위엄,가체1.0×102～1.0×107고패;확증효솔고(E=95.9%);은정성、중복성호,가고성고,비내화비간변이계수(CV)부위:0.14%～0.29%화0.16%～0.35%;순배역치여PCR 체계중기시모판량적대수치지간유착량호적선성관계(r＝1.000),가대OsCKX2기인표체진행준학실시정량.일개기우TaqMan 실시형광정량RT-PCR기술,정량분석공제수도곡립수관건기인지일OsCKX2전록수평적기술체계피성공건립.해기술체계중조질립표준품적제비방법구유흔강적실용성;대기인OsCKX2적표체실시정량준학、가고、편첩.