安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
16期
8330-8331,8337
,共3页
徐冉%汤雪燕%缪旻珉%曹碚生
徐冉%湯雪燕%繆旻珉%曹碚生
서염%탕설연%무민민%조배생
黄瓜%酸性α-半乳糖苷酶Ⅰ%增强型绿色荧光蛋白
黃瓜%痠性α-半乳糖苷酶Ⅰ%增彊型綠色熒光蛋白
황과%산성α-반유당감매Ⅰ%증강형록색형광단백
[目的]构建由CaMV 35S启动子调控的黄瓜α-半乳糖苷酶的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green flurescent protein,EGFP)融合表达载体.[方法]运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,分别以质粒pCambia 1303和pEGFP-N1为模板扩增CaMV 35S启动子序列和EGFP编码序列;运用反转录聚合酶链式反应(Reverse transcript -PCR,RT-PCR)技术,以黄瓜总RNA为模板扩增黄瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅰ编码序列;将上述3个片段插入表达载体pCambia 1381·c的多克隆位点,构建EGFP位于目的基因C端的α-半乳糖苷酶基因的EGFP融合表达载体.[结果]经酶切、测序等验证,黄瓜α-半乳糖苷酶-EGFP融合表达载体构建成功.[结论]为进一步研究黄瓜α-半乳糖苷酶的亚细胞定位奠定基础.
[目的]構建由CaMV 35S啟動子調控的黃瓜α-半乳糖苷酶的增彊型綠色熒光蛋白(enhanced green flurescent protein,EGFP)融閤錶達載體.[方法]運用聚閤酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)技術,分彆以質粒pCambia 1303和pEGFP-N1為模闆擴增CaMV 35S啟動子序列和EGFP編碼序列;運用反轉錄聚閤酶鏈式反應(Reverse transcript -PCR,RT-PCR)技術,以黃瓜總RNA為模闆擴增黃瓜痠性α-半乳糖苷酶Ⅰ編碼序列;將上述3箇片段插入錶達載體pCambia 1381·c的多剋隆位點,構建EGFP位于目的基因C耑的α-半乳糖苷酶基因的EGFP融閤錶達載體.[結果]經酶切、測序等驗證,黃瓜α-半乳糖苷酶-EGFP融閤錶達載體構建成功.[結論]為進一步研究黃瓜α-半乳糖苷酶的亞細胞定位奠定基礎.
[목적]구건유CaMV 35S계동자조공적황과α-반유당감매적증강형록색형광단백(enhanced green flurescent protein,EGFP)융합표체재체.[방법]운용취합매련식반응(polymerase chain reaction,PCR)기술,분별이질립pCambia 1303화pEGFP-N1위모판확증CaMV 35S계동자서렬화EGFP편마서렬;운용반전록취합매련식반응(Reverse transcript -PCR,RT-PCR)기술,이황과총RNA위모판확증황과산성α-반유당감매Ⅰ편마서렬;장상술3개편단삽입표체재체pCambia 1381·c적다극륭위점,구건EGFP위우목적기인C단적α-반유당감매기인적EGFP융합표체재체.[결과]경매절、측서등험증,황과α-반유당감매-EGFP융합표체재체구건성공.[결론]위진일보연구황과α-반유당감매적아세포정위전정기출.
