食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2010年
20期
376-381
,共6页
陈文炳%赵晨%邵碧英%江树勋%闫诚%李寿崧%林河通
陳文炳%趙晨%邵碧英%江樹勛%閆誠%李壽崧%林河通
진문병%조신%소벽영%강수훈%염성%리수숭%림하통
河豚鱼%引物筛选%PCR检测%优化
河豚魚%引物篩選%PCR檢測%優化
하돈어%인물사선%PCR검측%우화
根据Genbank公布的河豚鱼细胞色素b基因序列,应用软件Primer Premier 5.00版设计了7对引物,经过PCR筛选,确定可以在所有8个供试河豚鱼样品中检出目的DNA片段的引物HT-1,用于建立河豚鱼的PCR检测方法.对该PCR方法中6个因素包括退火温度、Mg2+终浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTPs终浓度、引物终浓度和模板DNA用量进行优化,确定优化的PCR扩增体系:10×PCR缓冲液2μL,MgCl2终浓度1.5mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U,dNTPs终浓度300μmol/L,引物终浓度0.2μmol/L,DNA模板400ng,加纯水至总体积20μL.扩增程序定为94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸30s,40个循环,72℃延伸5min.据此建立河豚鱼成分PCR检测方泫,并通过河豚鱼与非河豚鱼的PCR检测结果比较,验证了该方法的河豚鱼特异性.研究结果还表明,该方法的检出限为0.1%,含量为0.1%的河豚鱼样品PCR检出率至少在97.5%以上.
根據Genbank公佈的河豚魚細胞色素b基因序列,應用軟件Primer Premier 5.00版設計瞭7對引物,經過PCR篩選,確定可以在所有8箇供試河豚魚樣品中檢齣目的DNA片段的引物HT-1,用于建立河豚魚的PCR檢測方法.對該PCR方法中6箇因素包括退火溫度、Mg2+終濃度、Taq DNA聚閤酶用量、dNTPs終濃度、引物終濃度和模闆DNA用量進行優化,確定優化的PCR擴增體繫:10×PCR緩遲液2μL,MgCl2終濃度1.5mmol/L,Taq DNA聚閤酶1.0U,dNTPs終濃度300μmol/L,引物終濃度0.2μmol/L,DNA模闆400ng,加純水至總體積20μL.擴增程序定為94℃預變性5min,94℃變性30s,62℃退火30s,72℃延伸30s,40箇循環,72℃延伸5min.據此建立河豚魚成分PCR檢測方泫,併通過河豚魚與非河豚魚的PCR檢測結果比較,驗證瞭該方法的河豚魚特異性.研究結果還錶明,該方法的檢齣限為0.1%,含量為0.1%的河豚魚樣品PCR檢齣率至少在97.5%以上.
근거Genbank공포적하돈어세포색소b기인서렬,응용연건Primer Premier 5.00판설계료7대인물,경과PCR사선,학정가이재소유8개공시하돈어양품중검출목적DNA편단적인물HT-1,용우건립하돈어적PCR검측방법.대해PCR방법중6개인소포괄퇴화온도、Mg2+종농도、Taq DNA취합매용량、dNTPs종농도、인물종농도화모판DNA용량진행우화,학정우화적PCR확증체계:10×PCR완충액2μL,MgCl2종농도1.5mmol/L,Taq DNA취합매1.0U,dNTPs종농도300μmol/L,인물종농도0.2μmol/L,DNA모판400ng,가순수지총체적20μL.확증정서정위94℃예변성5min,94℃변성30s,62℃퇴화30s,72℃연신30s,40개순배,72℃연신5min.거차건립하돈어성분PCR검측방현,병통과하돈어여비하돈어적PCR검측결과비교,험증료해방법적하돈어특이성.연구결과환표명,해방법적검출한위0.1%,함량위0.1%적하돈어양품PCR검출솔지소재97.5%이상.
