中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
4期
347-351
,共5页
王文凯%钟桥%谢立苹%邵世和
王文凱%鐘橋%謝立蘋%邵世和
왕문개%종교%사립평%소세화
幽门螺杆菌cag4蛋白%原核表达%纯化%融合蛋白
幽門螺桿菌cag4蛋白%原覈錶達%純化%融閤蛋白
유문라간균cag4단백%원핵표체%순화%융합단백
目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白.方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌 BL21(DE3)进行异源表达.利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理.将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析.结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌 BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性.结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性.
目的:構建幽門螺桿菌cag4蛋白的原覈重組體繫,錶達、純化融閤蛋白.方法:利用PCR技術從幽門螺桿菌NCTC11637中剋隆瞭cag4基因;經T-A剋隆,酶切鑒定,構建瞭原覈錶達載體pET-28a-cag4;經測序鑒定正確後,轉化進入大腸埃希菌 BL21(DE3)進行異源錶達.利用IPTG體外誘導後,經SDS-PAGE和Western bolt鑒定目的蛋白錶達後,採用Ni2+-NTA柱在變性條件下純化目的蛋白,併對重組蛋白進行透析複性處理.將SDS煮沸法穫得的溶壁微毬菌肽聚糖摻入SDS-PAGE作為底物,進行酶譜分析.結果:成功擴增瞭cag4基因基因;重組質粒在大腸埃希菌 BL21(DE3)中誘導錶達齣pET-28a-cag4融閤蛋白;優化瞭pET-28a-cag4原覈錶達體繫的最適條件;Western bolt分析結果顯示錶達的基因重組蛋白與目的蛋白相符;酶譜分析顯示其具有明顯的肽聚糖水解活性.結論:幽門螺桿菌cag4蛋白具有溶菌糖基轉移酶活性.
목적:구건유문라간균cag4단백적원핵중조체계,표체、순화융합단백.방법:이용PCR기술종유문라간균NCTC11637중극륭료cag4기인;경T-A극륭,매절감정,구건료원핵표체재체pET-28a-cag4;경측서감정정학후,전화진입대장애희균 BL21(DE3)진행이원표체.이용IPTG체외유도후,경SDS-PAGE화Western bolt감정목적단백표체후,채용Ni2+-NTA주재변성조건하순화목적단백,병대중조단백진행투석복성처리.장SDS자비법획득적용벽미구균태취당참입SDS-PAGE작위저물,진행매보분석.결과:성공확증료cag4기인기인;중조질립재대장애희균 BL21(DE3)중유도표체출pET-28a-cag4융합단백;우화료pET-28a-cag4원핵표체체계적최괄조건;Western bolt분석결과현시표체적기인중조단백여목적단백상부;매보분석현시기구유명현적태취당수해활성.결론:유문라간균cag4단백구유용균당기전이매활성.
