CAJ | 학술논문

苦荞种子富含氨基酸均衡的蛋白质和高生物活性的黄酮类物质,是典型的药粮兼用作物.灌浆期是苦荞营养物质积累和合成的关键时期,分析灌浆期的基因表达对于苦荞种子有效物质的积累和调控研究有重要的价值.本实验以苦荞(Fagopyrum tartaricum)榆6-21为材料,采用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)技术构建种子灌浆期全长cDNA噬菌体文库.结果显示,所构建原始文库滴度为4.86× 105 pfu/mL,扩增文库滴度为6.2×109 pfu/mL,蓝白筛选证实文库的重组率为99.58％.插入片段的大小在500～3 500 bp.随机挑取环化的质粒克隆进行测序,获得文库中部分EST序列(GenBank登录号:GO477569,GO496285～GO496321).经生物信息学比对分析,54％ ESTs与功能已知基因有较高同源性,28％ ESTs与功能尚未确定的假设蛋白或未知蛋白高度同源,5％ ESTs无匹配的同源片段.其中储藏蛋白的EST占到已知功能EST的17.93％,其中包括10、16和22 kD储藏蛋白、11S、13S球蛋白、豌豆球蛋白以及油体蛋白等的基因,另外获得了2个苦荞种子发育期次生代谢相关的ESTs,分别为黄烷酮3-羧化酶和苯丙氨酸解氨酶的基因序列.这些结果说明构建的文库有较高的质量,可进一步从文库中分离苦荞种子蛋白以及次生物质代谢的相关基因.
고교충자부함안기산균형적단백질화고생물활성적황동류물질,시전형적약량겸용작물.관장기시고교영양물질적루화합성적관건시기,분석관장기적기인표체대우고교충자유효물질적적루화조공연구유중요적개치.본실험이고교(Fagopyrum tartaricum)유6-21위재료,채용SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)기술구건충자관장기전장cDNA서균체문고.결과현시,소구건원시문고적도위4.86× 105 pfu/mL,확증문고적도위6.2×109 pfu/mL,람백사선증실문고적중조솔위99.58％.삽입편단적대소재500～3 500 bp.수궤도취배화적질립극륭진행측서,획득문고중부분EST서렬(GenBank등록호:GO477569,GO496285～GO496321).경생물신식학비대분석,54％ ESTs여공능이지기인유교고동원성,28％ ESTs여공능상미학정적가설단백혹미지단백고도동원,5％ ESTs무필배적동원편단.기중저장단백적EST점도이지공능EST적17.93％,기중포괄10、16화22 kD저장단백、11S、13S구단백、완두구단백이급유체단백등적기인,령외획득료2개고교충자발육기차생대사상관적ESTs,분별위황완동3-최화매화분병안산해안매적기인서렬.저사결과설명구건적문고유교고적질량,가진일보종문고중분리고교충자단백이급차생물질대사적상관기인.