中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2006年
9期
807-812
,共6页
李朝霞%席云%洪国强%胡波%梁敏坚%许珏%李林
李朝霞%席雲%洪國彊%鬍波%樑敏堅%許玨%李林
리조하%석운%홍국강%호파%량민견%허각%리림
肝炎e抗原,乙型%基因表达%毕赤酵母%酶联免疫吸附测定
肝炎e抗原,乙型%基因錶達%畢赤酵母%酶聯免疫吸附測定
간염e항원,을형%기인표체%필적효모%매련면역흡부측정
目的 合成适合酵母表达的乙型肝炎病毒(HBV)e抗原基因,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性和特异性的重组乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg).方法 采取基因搭桥法及Taq酶聚合反应,选用酵母菌偏爱的同义密码子替换野生型e基因的部分密码子,制备合成e基因,插入pPICZαA酵母菌表达载体.携带有合成e基因的pPICZαA转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HBeAg.结果 酶切电泳及DNA测序证实合成的e基因已正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、immunoblt及ELISA显示HBeAg在毕赤酵母中高效分泌表达,表达量约为63 mg/L,培养上清液ELISA测定效价1∶ 81 920,最大吸光度值达2.8;重组HBeAg与乙型肝炎病毒核心抗体间无交叉反应.结论 毕赤酵母表达系统高效分泌表达出与乙型肝炎病毒核心抗原间无交叉抗原性、具有良好免疫反应性的HBeAg.
目的 閤成適閤酵母錶達的乙型肝炎病毒(HBV)e抗原基因,在畢赤酵母中錶達齣高免疫反應性和特異性的重組乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg).方法 採取基因搭橋法及Taq酶聚閤反應,選用酵母菌偏愛的同義密碼子替換野生型e基因的部分密碼子,製備閤成e基因,插入pPICZαA酵母菌錶達載體.攜帶有閤成e基因的pPICZαA轉化畢赤酵母菌株GS115,經甲醇誘導錶達HBeAg.結果 酶切電泳及DNA測序證實閤成的e基因已正確剋隆到錶達載體中;聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、immunoblt及ELISA顯示HBeAg在畢赤酵母中高效分泌錶達,錶達量約為63 mg/L,培養上清液ELISA測定效價1∶ 81 920,最大吸光度值達2.8;重組HBeAg與乙型肝炎病毒覈心抗體間無交扠反應.結論 畢赤酵母錶達繫統高效分泌錶達齣與乙型肝炎病毒覈心抗原間無交扠抗原性、具有良好免疫反應性的HBeAg.
목적 합성괄합효모표체적을형간염병독(HBV)e항원기인,재필적효모중표체출고면역반응성화특이성적중조을형간염병독e항원(HBeAg).방법 채취기인탑교법급Taq매취합반응,선용효모균편애적동의밀마자체환야생형e기인적부분밀마자,제비합성e기인,삽입pPICZαA효모균표체재체.휴대유합성e기인적pPICZαA전화필적효모균주GS115,경갑순유도표체HBeAg.결과 매절전영급DNA측서증실합성적e기인이정학극륭도표체재체중;취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、immunoblt급ELISA현시HBeAg재필적효모중고효분비표체,표체량약위63 mg/L,배양상청액ELISA측정효개1∶ 81 920,최대흡광도치체2.8;중조HBeAg여을형간염병독핵심항체간무교차반응.결론 필적효모표체계통고효분비표체출여을형간염병독핵심항원간무교차항원성、구유량호면역반응성적HBeAg.
