蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2006年
4期
510-514
,共5页
陈蔚青%史锋%朱成钢%申屠超
陳蔚青%史鋒%硃成鋼%申屠超
진위청%사봉%주성강%신도초
人白细胞介素-4基因%克隆%表达%家蚕杆状病毒表达载体系统
人白細胞介素-4基因%剋隆%錶達%傢蠶桿狀病毒錶達載體繫統
인백세포개소-4기인%극륭%표체%가잠간상병독표체재체계통
采用RT-PCR法从经LPS诱导刺激的人外周血淋巴细胞中克隆了人白细胞介素-4 (human interleukin-4, hIL-4) 基因.为高效表达hIL-4,促进其临床应用,将hIL-4插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,构建重组载体pBacPAK-hIL-4,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒BacPAK-hIL-4.将重组病毒感染家蚕5龄幼虫和蚕蛹 (1×105 PFU/头),表达产物以ELISA 、SDS-PAGE和Western blotting方法检测,用活化的人外周血T淋巴细胞测定表达产物体外生物活性.ELISA法结果表明hIL-4在感染病毒后96 h 的蚕血淋巴和120 h 的蚕蛹中表达量最高,分别达到2.3 μg/ mL蚕血淋巴和10.2 μg/ mL体液;SDS-PAGE、Western blotting分析表明表达产物分子量约20 kD;表达产物对活化的T淋巴细胞增殖具有明显促进作用.
採用RT-PCR法從經LPS誘導刺激的人外週血淋巴細胞中剋隆瞭人白細胞介素-4 (human interleukin-4, hIL-4) 基因.為高效錶達hIL-4,促進其臨床應用,將hIL-4插入傢蠶桿狀病毒轉移載體pBacPAK8中,構建重組載體pBacPAK-hIL-4,併與線性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共轉染傢蠶BmN細胞,穫得重組病毒BacPAK-hIL-4.將重組病毒感染傢蠶5齡幼蟲和蠶蛹 (1×105 PFU/頭),錶達產物以ELISA 、SDS-PAGE和Western blotting方法檢測,用活化的人外週血T淋巴細胞測定錶達產物體外生物活性.ELISA法結果錶明hIL-4在感染病毒後96 h 的蠶血淋巴和120 h 的蠶蛹中錶達量最高,分彆達到2.3 μg/ mL蠶血淋巴和10.2 μg/ mL體液;SDS-PAGE、Western blotting分析錶明錶達產物分子量約20 kD;錶達產物對活化的T淋巴細胞增殖具有明顯促進作用.
채용RT-PCR법종경LPS유도자격적인외주혈림파세포중극륭료인백세포개소-4 (human interleukin-4, hIL-4) 기인.위고효표체hIL-4,촉진기림상응용,장hIL-4삽입가잠간상병독전이재체pBacPAK8중,구건중조재체pBacPAK-hIL-4,병여선성화병독Bm-BacPAK6 DNA공전염가잠BmN세포,획득중조병독BacPAK-hIL-4.장중조병독감염가잠5령유충화잠용 (1×105 PFU/두),표체산물이ELISA 、SDS-PAGE화Western blotting방법검측,용활화적인외주혈T림파세포측정표체산물체외생물활성.ELISA법결과표명hIL-4재감염병독후96 h 적잠혈림파화120 h 적잠용중표체량최고,분별체도2.3 μg/ mL잠혈림파화10.2 μg/ mL체액;SDS-PAGE、Western blotting분석표명표체산물분자량약20 kD;표체산물대활화적T림파세포증식구유명현촉진작용.
