第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2007年
3期
244-246
,共3页
曹晓瑞%朱庆生%张大伟%李立文%杨泉生
曹曉瑞%硃慶生%張大偉%李立文%楊泉生
조효서%주경생%장대위%리립문%양천생
融合蛋白%可溶表达%纯化
融閤蛋白%可溶錶達%純化
융합단백%가용표체%순화
目的:制备GST-p60PLAD融合蛋白. 方法:依据人p60PLAD氨基酸序列,根据大肠杆菌偏爱密码子进行反翻译,获得适合在大肠杆菌中表达的基因序列. 根据该基因序列设计五条引物,用重叠延伸PCR法获得编码人p60PLAD的基因,进而将其克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌BLR(DE3)polys. 经IPTG诱导表达后收集菌体,超声裂解,将上清液经GSTrapFF亲和层析柱纯化、经HiTrap脱盐柱脱盐,用SDS-PAGE进行分析. 结果:成功构建重组质粒pGEX-4T-2-p60PLAD,经DNA 测序证实插入序列与设计完全一致. 并在大肠杆菌中高表达出Mr约为34×103大小具有可溶性的目的蛋白,经亲和层析柱纯化后获得纯度很高的GST-p60PLAD融合蛋白. 结论:成功制备了高纯度的GST-p60PLAD融合蛋白,为进一步探讨p60PLAD蛋白的结构和生物学活性提供必要的物质基础.
目的:製備GST-p60PLAD融閤蛋白. 方法:依據人p60PLAD氨基痠序列,根據大腸桿菌偏愛密碼子進行反翻譯,穫得適閤在大腸桿菌中錶達的基因序列. 根據該基因序列設計五條引物,用重疊延伸PCR法穫得編碼人p60PLAD的基因,進而將其剋隆入原覈錶達載體pGEX-4T-2中,轉化大腸桿菌BLR(DE3)polys. 經IPTG誘導錶達後收集菌體,超聲裂解,將上清液經GSTrapFF親和層析柱純化、經HiTrap脫鹽柱脫鹽,用SDS-PAGE進行分析. 結果:成功構建重組質粒pGEX-4T-2-p60PLAD,經DNA 測序證實插入序列與設計完全一緻. 併在大腸桿菌中高錶達齣Mr約為34×103大小具有可溶性的目的蛋白,經親和層析柱純化後穫得純度很高的GST-p60PLAD融閤蛋白. 結論:成功製備瞭高純度的GST-p60PLAD融閤蛋白,為進一步探討p60PLAD蛋白的結構和生物學活性提供必要的物質基礎.
목적:제비GST-p60PLAD융합단백. 방법:의거인p60PLAD안기산서렬,근거대장간균편애밀마자진행반번역,획득괄합재대장간균중표체적기인서렬. 근거해기인서렬설계오조인물,용중첩연신PCR법획득편마인p60PLAD적기인,진이장기극륭입원핵표체재체pGEX-4T-2중,전화대장간균BLR(DE3)polys. 경IPTG유도표체후수집균체,초성렬해,장상청액경GSTrapFF친화층석주순화、경HiTrap탈염주탈염,용SDS-PAGE진행분석. 결과:성공구건중조질립pGEX-4T-2-p60PLAD,경DNA 측서증실삽입서렬여설계완전일치. 병재대장간균중고표체출Mr약위34×103대소구유가용성적목적단백,경친화층석주순화후획득순도흔고적GST-p60PLAD융합단백. 결론:성공제비료고순도적GST-p60PLAD융합단백,위진일보탐토p60PLAD단백적결구화생물학활성제공필요적물질기출.
