贵州师范大学学报（自然科学版）
貴州師範大學學報（自然科學版）
귀주사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF GUIZHOU NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
1期
14-17
,共4页
usp14基因%脱泛素蛋白%大肠杆菌%表达纯化
usp14基因%脫汎素蛋白%大腸桿菌%錶達純化
usp14기인%탈범소단백%대장간균%표체순화
采用PCR技术从人胎脑cDNA文库中克隆了usp14(ubiquitin-specific peptidase 14)基因编码区全长序列.序列分析表明人usp14基因含有peptidase 蛋白酶C19A保守区,将usp14基因与pET-28b(+)载体相连,构建表达载体pET28b/usp14;把该表达载体转入大肠杆菌Rosetta (DE3) pLyS, 以Isopropyl-D-thiogalactopyranoside (IPTG)诱导25°C 6小时,USP14蛋白获得高效表达.对表达产物进行Western blotting检测,并用Ni-NTA亲和层析技术获得了纯化的人USP14蛋白,表达的目的蛋白大小约为56kDa.
採用PCR技術從人胎腦cDNA文庫中剋隆瞭usp14(ubiquitin-specific peptidase 14)基因編碼區全長序列.序列分析錶明人usp14基因含有peptidase 蛋白酶C19A保守區,將usp14基因與pET-28b(+)載體相連,構建錶達載體pET28b/usp14;把該錶達載體轉入大腸桿菌Rosetta (DE3) pLyS, 以Isopropyl-D-thiogalactopyranoside (IPTG)誘導25°C 6小時,USP14蛋白穫得高效錶達.對錶達產物進行Western blotting檢測,併用Ni-NTA親和層析技術穫得瞭純化的人USP14蛋白,錶達的目的蛋白大小約為56kDa.
채용PCR기술종인태뇌cDNA문고중극륭료usp14(ubiquitin-specific peptidase 14)기인편마구전장서렬.서렬분석표명인usp14기인함유peptidase 단백매C19A보수구,장usp14기인여pET-28b(+)재체상련,구건표체재체pET28b/usp14;파해표체재체전입대장간균Rosetta (DE3) pLyS, 이Isopropyl-D-thiogalactopyranoside (IPTG)유도25°C 6소시,USP14단백획득고효표체.대표체산물진행Western blotting검측,병용Ni-NTA친화층석기술획득료순화적인USP14단백,표체적목적단백대소약위56kDa.
