安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2008年
18期
7650-7652,7761
,共4页
冯挺财%邵谱%胡珩%杨正涛%张乃生
馮挺財%邵譜%鬍珩%楊正濤%張迺生
풍정재%소보%호형%양정도%장내생
牛乳铁蛋白%cELISA%定量检测
牛乳鐵蛋白%cELISA%定量檢測
우유철단백%cELISA%정량검측
[目的]建立一种检测牛乳铁蛋白(LF)含量的竞争ELISA检测方法.[方法]制备鼠抗牛LF单克隆抗体,采用直接竞争ELISA测定酶标记物效价,建立牛LF的直接竞争ELISA检测方法.[结果]纯化后,制备的鼠抗牛LF单抗效价达1∶1 280 000,且鉴定为IgG1.该单抗对牛乳铁蛋白具有很强的特异性.制备酶标单抗的效价为1∶640 000.抗原包被物和酶标单抗的最适工作浓度分别为1.0 μg/ml和 1∶40 000.抗原用碳酸盐缓冲液(pH值为9.6)包被先在4℃过夜、再37℃放置2 h的效果最好.采用2%牛血清白蛋白作为封闭剂的效果最好.在31.25～1 000 ng/ml浓度范围内,牛乳铁蛋白的logit (B/B0)与牛乳铁蛋白浓度的对数值呈显著的线性关系,其回归方程为 y=-1.8991x+5.043 3(R2=0.9873).[结论]该研究为研制用于奶牛乳腺炎诊断的牛LF检测试剂盒奠定基础.
[目的]建立一種檢測牛乳鐵蛋白(LF)含量的競爭ELISA檢測方法.[方法]製備鼠抗牛LF單剋隆抗體,採用直接競爭ELISA測定酶標記物效價,建立牛LF的直接競爭ELISA檢測方法.[結果]純化後,製備的鼠抗牛LF單抗效價達1∶1 280 000,且鑒定為IgG1.該單抗對牛乳鐵蛋白具有很彊的特異性.製備酶標單抗的效價為1∶640 000.抗原包被物和酶標單抗的最適工作濃度分彆為1.0 μg/ml和 1∶40 000.抗原用碳痠鹽緩遲液(pH值為9.6)包被先在4℃過夜、再37℃放置2 h的效果最好.採用2%牛血清白蛋白作為封閉劑的效果最好.在31.25～1 000 ng/ml濃度範圍內,牛乳鐵蛋白的logit (B/B0)與牛乳鐵蛋白濃度的對數值呈顯著的線性關繫,其迴歸方程為 y=-1.8991x+5.043 3(R2=0.9873).[結論]該研究為研製用于奶牛乳腺炎診斷的牛LF檢測試劑盒奠定基礎.
[목적]건립일충검측우유철단백(LF)함량적경쟁ELISA검측방법.[방법]제비서항우LF단극륭항체,채용직접경쟁ELISA측정매표기물효개,건립우LF적직접경쟁ELISA검측방법.[결과]순화후,제비적서항우LF단항효개체1∶1 280 000,차감정위IgG1.해단항대우유철단백구유흔강적특이성.제비매표단항적효개위1∶640 000.항원포피물화매표단항적최괄공작농도분별위1.0 μg/ml화 1∶40 000.항원용탄산염완충액(pH치위9.6)포피선재4℃과야、재37℃방치2 h적효과최호.채용2%우혈청백단백작위봉폐제적효과최호.재31.25～1 000 ng/ml농도범위내,우유철단백적logit (B/B0)여우유철단백농도적대수치정현저적선성관계,기회귀방정위 y=-1.8991x+5.043 3(R2=0.9873).[결론]해연구위연제용우내우유선염진단적우LF검측시제합전정기출.
