中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
2期
178-181,186
,共5页
薛念波%方六荣%江云波%俞明敏%李彬%罗锐%陈焕春%肖少波
薛唸波%方六榮%江雲波%俞明敏%李彬%囉銳%陳煥春%肖少波
설념파%방륙영%강운파%유명민%리빈%라예%진환춘%초소파
伪狂犬病毒%UL38基因%序列分析%表达
偽狂犬病毒%UL38基因%序列分析%錶達
위광견병독%UL38기인%서렬분석%표체
以伪狂犬病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增UL38全长基因,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定.序列分析显示UL38基因全长1 107 bp,可编码369个氨基酸.将该基因克隆到原核表达载体pQE-82L的6×His下游,获得原核表达质粒pQE-UL38,IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达并获得相对分子质量约40 000的融合表达蛋白6×His-UL38,Western blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应.进一步将UL38基因插入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP基因的5′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL38,转染Hela细胞,24、48 h通过激光共聚焦显微镜观察显示pEGFP-UL38,24 h荧光主要分布在胞浆,有部分分布在核内,但随时间延长,荧光逐渐向细胞核中转移,在转染后48 h几乎完全定位于核内.但对照载体pEGFP-N1转染细胞的荧光一直呈弥散型分布于整个细胞.
以偽狂犬病毒Ea株基因組DNA為模闆,通過PCR擴增UL38全長基因,將PCR產物剋隆于pMD18-T載體,併採用雙脫氧終止法進行序列測定.序列分析顯示UL38基因全長1 107 bp,可編碼369箇氨基痠.將該基因剋隆到原覈錶達載體pQE-82L的6×His下遊,穫得原覈錶達質粒pQE-UL38,IPTG誘導在大腸桿菌中成功錶達併穫得相對分子質量約40 000的融閤錶達蛋白6×His-UL38,Western blot試驗證實錶達的融閤蛋白能與抗6×His的單抗髮生特異性反應.進一步將UL38基因插入真覈錶達載體pEGFP-N1中EGFP基因的5′耑,穫得與EGFP融閤錶達的真覈錶達質粒pEGFP-UL38,轉染Hela細胞,24、48 h通過激光共聚焦顯微鏡觀察顯示pEGFP-UL38,24 h熒光主要分佈在胞漿,有部分分佈在覈內,但隨時間延長,熒光逐漸嚮細胞覈中轉移,在轉染後48 h幾乎完全定位于覈內.但對照載體pEGFP-N1轉染細胞的熒光一直呈瀰散型分佈于整箇細胞.
이위광견병독Ea주기인조DNA위모판,통과PCR확증UL38전장기인,장PCR산물극륭우pMD18-T재체,병채용쌍탈양종지법진행서렬측정.서렬분석현시UL38기인전장1 107 bp,가편마369개안기산.장해기인극륭도원핵표체재체pQE-82L적6×His하유,획득원핵표체질립pQE-UL38,IPTG유도재대장간균중성공표체병획득상대분자질량약40 000적융합표체단백6×His-UL38,Western blot시험증실표체적융합단백능여항6×His적단항발생특이성반응.진일보장UL38기인삽입진핵표체재체pEGFP-N1중EGFP기인적5′단,획득여EGFP융합표체적진핵표체질립pEGFP-UL38,전염Hela세포,24、48 h통과격광공취초현미경관찰현시pEGFP-UL38,24 h형광주요분포재포장,유부분분포재핵내,단수시간연장,형광축점향세포핵중전이,재전염후48 h궤호완전정위우핵내.단대조재체pEGFP-N1전염세포적형광일직정미산형분포우정개세포.
