CAJ | 학술논문

目的:构建T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3基因及其融合蛋白真核表达载体,并对TIM-3基因进行生物信息学分析.方法:采用Trizol法从人外周血单个核细胞提取总mRNA,利用两步法RT-PCR技术扩增TIM-3及其胞外(结构)域基因片段和人IgGl Fc基因片段.并将他们分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过PCR及测序进行鉴定.序列分析后将TIM-3胞外(结构)域基因片段亚克隆到已经克隆了人IgGl Fc基因片段真核表达载体pcDAN3.1(+)上；并通过PCR及双酶切进行鉴定.应用生物信息学初步分析TIM-3基因的物理化学性质、蛋白质结构域、功能.结果:成功从PBMC中提取并逆转录的cDNA扩增出TIM-3及其胞外(结构)域基因和人IgGl Fc基因；经PCR、酶切鉴定、测序分析表明它们与GenBank提供的序列信息完全相同.生物信息学分析结果表明TIM-3蛋白为稳定亲水性蛋白,有1个跨膜螺旋结构,相对分子量是33.4KD,等电点pI为5.54.该蛋白含约32.56％的α-螺旋,8.27％的延伸链,49.17％的不规则卷曲,1段21个氨基酸组成的信号肽.TIM-3蛋白亚细胞定位于内质网、高尔基体、液泡、细胞膜上.功能分析预测TIM-3蛋白具有受体和信号转导功能.结论:成功构建TIM-3基因及其融合蛋白真核表达载体,并利用生物分析软件对其进行生物信息学分析.了解TIM-3基因的性质特征,为进一步研究该基因奠定基础.
목적:구건T세포면역구단백점단백-3기인급기융합단백진핵표체재체,병대TIM-3기인진행생물신식학분석.방법:채용Trizol법종인외주혈단개핵세포제취총mRNA,이용량보법RT-PCR기술확증TIM-3급기포외(결구)역기인편단화인IgGl Fc기인편단.병장타문분별극륭도진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,통과PCR급측서진행감정.서렬분석후장TIM-3포외(결구)역기인편단아극륭도이경극륭료인IgGl Fc기인편단진핵표체재체pcDAN3.1(+)상；병통과PCR급쌍매절진행감정.응용생물신식학초보분석TIM-3기인적물이화학성질、단백질결구역、공능.결과:성공종PBMC중제취병역전록적cDNA확증출TIM-3급기포외(결구)역기인화인IgGl Fc기인；경PCR、매절감정、측서분석표명타문여GenBank제공적서렬신식완전상동.생물신식학분석결과표명TIM-3단백위은정친수성단백,유1개과막라선결구,상대분자량시33.4KD,등전점pI위5.54.해단백함약32.56％적α-라선,8.27％적연신련,49.17％적불규칙권곡,1단21개안기산조성적신호태.TIM-3단백아세포정위우내질망、고이기체、액포、세포막상.공능분석예측TIM-3단백구유수체화신호전도공능.결론:성공구건TIM-3기인급기융합단백진핵표체재체,병이용생물분석연건대기진행생물신식학분석.료해TIM-3기인적성질특정,위진일보연구해기인전정기출.