中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2012年
6期
881-884
,共4页
王通%郭嘉慧%陈智鹏%银兴峰%马文心%崔毅峙
王通%郭嘉慧%陳智鵬%銀興峰%馬文心%崔毅峙
왕통%곽가혜%진지붕%은흥봉%마문심%최의치
小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)%SILAC%质谱%标记效率%蛋白质组%定量
小鼠骨髓來源巨噬細胞(BMM)%SILAC%質譜%標記效率%蛋白質組%定量
소서골수래원거서세포(BMM)%SILAC%질보%표기효솔%단백질조%정량
目的 作为模型细胞之一,小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)是药理学、药效学研究的重要工具和对象.然而,由于巨噬细胞增殖能力较弱,代谢标记细胞内蛋白一直是巨噬细胞生物学中的一个难题.因此,本研究以SILAC(stable isotope labeling with amino acids in cell culture)方法标记BMM.方法 小鼠骨髓细胞的分离,以M-CSF诱导6 d并制备BMM,同时,SILAC标记细胞内蛋白;进而,裂解细胞并收集蛋白质,以SDS-PAGE进行初步分离,经胶内酶解成肽段,再通过质谱分析测定,统计得其标记效率.结果 小鼠骨髓细胞在分化6 d时点成熟BMM可占细胞总数的0.965.以70 ku条带为研究对象,d 6、8和d 10鉴定到重链赖氨酸标记蛋白数分别为18、12和13个.其中,有8个蛋白在该3个时点中均被检出.统计结果表明3个时点的重链赖氨酸蛋白标记效率分别为(90.62±0.03)%、(90.23±0.03)%和(90.40±0.02)%,达到了SILAC研究的要求.结论 该方法解决了BMM的SILAC标记问题,可为以巨噬细胞为研究对象的药理学研究提供有效的研究手段.
目的 作為模型細胞之一,小鼠骨髓來源巨噬細胞(BMM)是藥理學、藥效學研究的重要工具和對象.然而,由于巨噬細胞增殖能力較弱,代謝標記細胞內蛋白一直是巨噬細胞生物學中的一箇難題.因此,本研究以SILAC(stable isotope labeling with amino acids in cell culture)方法標記BMM.方法 小鼠骨髓細胞的分離,以M-CSF誘導6 d併製備BMM,同時,SILAC標記細胞內蛋白;進而,裂解細胞併收集蛋白質,以SDS-PAGE進行初步分離,經膠內酶解成肽段,再通過質譜分析測定,統計得其標記效率.結果 小鼠骨髓細胞在分化6 d時點成熟BMM可佔細胞總數的0.965.以70 ku條帶為研究對象,d 6、8和d 10鑒定到重鏈賴氨痠標記蛋白數分彆為18、12和13箇.其中,有8箇蛋白在該3箇時點中均被檢齣.統計結果錶明3箇時點的重鏈賴氨痠蛋白標記效率分彆為(90.62±0.03)%、(90.23±0.03)%和(90.40±0.02)%,達到瞭SILAC研究的要求.結論 該方法解決瞭BMM的SILAC標記問題,可為以巨噬細胞為研究對象的藥理學研究提供有效的研究手段.
목적 작위모형세포지일,소서골수래원거서세포(BMM)시약이학、약효학연구적중요공구화대상.연이,유우거서세포증식능력교약,대사표기세포내단백일직시거서세포생물학중적일개난제.인차,본연구이SILAC(stable isotope labeling with amino acids in cell culture)방법표기BMM.방법 소서골수세포적분리,이M-CSF유도6 d병제비BMM,동시,SILAC표기세포내단백;진이,렬해세포병수집단백질,이SDS-PAGE진행초보분리,경효내매해성태단,재통과질보분석측정,통계득기표기효솔.결과 소서골수세포재분화6 d시점성숙BMM가점세포총수적0.965.이70 ku조대위연구대상,d 6、8화d 10감정도중련뢰안산표기단백수분별위18、12화13개.기중,유8개단백재해3개시점중균피검출.통계결과표명3개시점적중련뢰안산단백표기효솔분별위(90.62±0.03)%、(90.23±0.03)%화(90.40±0.02)%,체도료SILAC연구적요구.결론 해방법해결료BMM적SILAC표기문제,가위이거서세포위연구대상적약이학연구제공유효적연구수단.
