CAJ | 학술논문

目的干扰素调节因子(interferon regulatory factors, IRF)3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子,寻找IRF-3新的基因拼接异构体, 研究其结构及功能. 方法抽提人类细胞RNA,用IRF-3已发表序列设计引物,作cDNA末端快速放大(RACE)及RT-PCR,生物信息学方法比较新序列,亚克隆IRF-3b至pcDNA3.1-flag,转染人胚胎肾上皮293细胞,用抗flag抗体作Western blot分析,用荧光素酶功能分析的方法观测IRF-3b对病毒诱导的干扰素β启动子荧光素酶活性的影响. 结果发现了一种新的IRF-3拼接异构体IRF-3b,IRF-3b用了紧接第七外显子前的16个第六内含子的碱基,导致阅读框架移位,相应蛋白质的C端第328～452位为不同于IRF-3的新C末端.Western blot出现预期的相对分子质量(Mr)为57.75×103的IRF-3b蛋白强阳性条带.新的外显子序列可在小鼠的表达序列标签(EST)表达库中找到同源序列,提示这种新的异构体在生物演进中有其保守功能,IRF-3b荧光素酶功能分析显示,该同分异构体能抑制病毒诱导的干扰素β启动子活性至对照组的40%～50%. 结论新的异构体的发现为IRF-3这一重要分子的功能调节提供了新的线索,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂,提示其功能为干扰素产生的精细调节成分,可防止干扰素的过度产生,它们在人类疾病中的病理意义值得进一步探讨.
목적간우소조절인자(interferon regulatory factors, IRF)3시병독감염후조절간우소기인전록중요적전록인자,심조IRF-3신적기인병접이구체, 연구기결구급공능. 방법추제인류세포RNA,용IRF-3이발표서렬설계인물,작cDNA말단쾌속방대(RACE)급RT-PCR,생물신식학방법비교신서렬,아극륭IRF-3b지pcDNA3.1-flag,전염인배태신상피293세포,용항flag항체작Western blot분석,용형광소매공능분석적방법관측IRF-3b대병독유도적간우소β계동자형광소매활성적영향. 결과발현료일충신적IRF-3병접이구체IRF-3b,IRF-3b용료긴접제칠외현자전적16개제륙내함자적감기,도치열독광가이위,상응단백질적C단제328～452위위불동우IRF-3적신C말단.Western blot출현예기적상대분자질량(Mr)위57.75×103적IRF-3b단백강양성조대.신적외현자서렬가재소서적표체서렬표첨(EST)표체고중조도동원서렬,제시저충신적이구체재생물연진중유기보수공능,IRF-3b형광소매공능분석현시,해동분이구체능억제병독유도적간우소β계동자활성지대조조적40%～50%. 결론신적이구체적발현위IRF-3저일중요분자적공능조절제공료신적선색,타가능시병독감염통로중간우소적현성부성억제제,제시기공능위간우소산생적정세조절성분,가방지간우소적과도산생,타문재인류질병중적병리의의치득진일보탐토.