北京大学学报(自然科学版)
北京大學學報(自然科學版)
북경대학학보(자연과학판)
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS PEKINENSIS
2001年
6期
785-790
,共6页
导向溶栓%连接肽%昆虫细胞%表达
導嚮溶栓%連接肽%昆蟲細胞%錶達
도향용전%련접태%곤충세포%표체
为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达.表达产物分泌到上清中,共转染后第5d(天)用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107 IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性(25 IU/mL)高.ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力.Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合.
為瞭提高重組導嚮溶栓分子scFv-UK32的溶纖活性,通過重組PCR方法在編碼scFv與UK32的堿基之間引入編碼KLGGGG連接肽的堿基序列,併剋隆到轉移載體pBacPAK9上,通過與線性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共轉染到昆蟲細胞Sf 9內,進行錶達.錶達產物分泌到上清中,共轉染後第5d(天)用纖維平闆法測得Sf 9細胞上清溶纖活性達到107 IU/mL,比未引入連接肽的scFv-UK32的錶達活性(25 IU/mL)高.ELISA實驗錶明共轉染上清具有明顯對活化血小闆特異結閤能力.Western Blotting實驗錶明共轉染上清可與Pro-UK的單抗特異結閤.
위료제고중조도향용전분자scFv-UK32적용섬활성,통과중조PCR방법재편마scFv여UK32적감기지간인입편마KLGGGG련접태적감기서렬,병극륭도전이재체pBacPAK9상,통과여선성병독DNA BacPAK6/Bsu36I digest공전염도곤충세포Sf 9내,진행표체.표체산물분비도상청중,공전염후제5d(천)용섬유평판법측득Sf 9세포상청용섬활성체도107 IU/mL,비미인입련접태적scFv-UK32적표체활성(25 IU/mL)고.ELISA실험표명공전염상청구유명현대활화혈소판특이결합능력.Western Blotting실험표명공전염상청가여Pro-UK적단항특이결합.
