中国兽医科技
中國獸醫科技
중국수의과기
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE AND TECHNOLOGY
2005年
10期
761-765
,共5页
刘丽娜%何启盖%陈焕春%刘正飞%贝为成
劉麗娜%何啟蓋%陳煥春%劉正飛%貝為成
류려나%하계개%진환춘%류정비%패위성
猪胸膜肺炎放线杆菌%荚膜多糖基因%克隆%表达%细胞毒性试验
豬胸膜肺炎放線桿菌%莢膜多糖基因%剋隆%錶達%細胞毒性試驗
저흉막폐염방선간균%협막다당기인%극륭%표체%세포독성시험
参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物,通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC 3个基因,获得长约1 137、429、1 146 bp的片段,将其分别克隆到pMD 18-T中,经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子;再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后,转化BL21,在IPTG诱导下获得高效表达,经Western-blotting检测证实,表达产物CpsC有生物学活性,CpsA、CpsB无活性;将3种表达产物等量混合,做10倍递进稀释后,与分离出的猪嗜中性粒细胞作用,37 ℃、50 mL/L CO2培养箱中温育4 h后加入底物液,测定D492 nm值.结果表明,App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用.
參攷GenBank中豬胸膜肺炎放線桿菌(App)血清2型莢膜多糖基因的序列分彆設計瞭3對特異性引物,通過PCR分彆擴增瞭CpsA、CpsB、CpsC 3箇基因,穫得長約1 137、429、1 146 bp的片段,將其分彆剋隆到pMD 18-T中,經酶切鑒定和序列分析穫得瞭暘性剋隆子;再將CpsA、CpsB、CpsC分彆插入原覈錶達載體pGEX-KG後,轉化BL21,在IPTG誘導下穫得高效錶達,經Western-blotting檢測證實,錶達產物CpsC有生物學活性,CpsA、CpsB無活性;將3種錶達產物等量混閤,做10倍遞進稀釋後,與分離齣的豬嗜中性粒細胞作用,37 ℃、50 mL/L CO2培養箱中溫育4 h後加入底物液,測定D492 nm值.結果錶明,App莢膜多糖對豬嗜中性粒細胞無毒性作用.
삼고GenBank중저흉막폐염방선간균(App)혈청2형협막다당기인적서렬분별설계료3대특이성인물,통과PCR분별확증료CpsA、CpsB、CpsC 3개기인,획득장약1 137、429、1 146 bp적편단,장기분별극륭도pMD 18-T중,경매절감정화서렬분석획득료양성극륭자;재장CpsA、CpsB、CpsC분별삽입원핵표체재체pGEX-KG후,전화BL21,재IPTG유도하획득고효표체,경Western-blotting검측증실,표체산물CpsC유생물학활성,CpsA、CpsB무활성;장3충표체산물등량혼합,주10배체진희석후,여분리출적저기중성립세포작용,37 ℃、50 mL/L CO2배양상중온육4 h후가입저물액,측정D492 nm치.결과표명,App협막다당대저기중성립세포무독성작용.
