中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2008年
4期
487-491
,共5页
柏涛%舒钧%王建龙%陆继鹏%李伟强%浦波
柏濤%舒鈞%王建龍%陸繼鵬%李偉彊%浦波
백도%서균%왕건룡%륙계붕%리위강%포파
组织工程%MSCs%自体%骨基质明胶%关节软骨缺损%兔
組織工程%MSCs%自體%骨基質明膠%關節軟骨缺損%兔
조직공정%MSCs%자체%골기질명효%관절연골결손%토
目的 研究兔MSCs向软骨细胞方向诱导后复合自体双相骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG)对膝关节软骨缺损的修复作用.方法 健康成年新西兰大白兔24只,雌雄不限,体重2～3 kg,随机分为A、B、C组,每组8只.取A组骨髓行原代培养,胰酶消化按1:2比例传至第5代,倒置相差显微镜观察细胞形态.取1、3、5代细胞绘制生长曲线.于第3代MSCs生长密集时加入TGF-a1 10 ng/mL、IGF-1 10 ng/mL、维生素C 50 ng/mL诱导8 d后倒置相差显微镜下观察,爬片行免疫组织化学及Mallory染色.取A组髂骨按Urist方法 制备双相BMG,将第3代经诱导8 d得到的种子细胞以5 X 106/mL密度接种于自体BMG制备细胞.载体复合物,体外培养3 d后扫描电镜观察.制作膝关节软骨直径3 mm,深3 mm的缺损模型,A组植入自体细胞.载体复合物,B组植入自体BMG,C组不作处理,第8、12周取材行大体观察、HE染色、免疫组织化学染色观察,Wakitani法组织学评分.结果 倒置相差显微镜观察MSCs原代细胞呈短梭形;传代细胞呈长梭形.传代细胞1～3 d增殖缓慢,3 d后增殖旺盛,7～8 d进入平台期,第3代增殖最为旺盛.诱导后MSCs细胞呈椭圆形,Ⅱ型胶原、S-100免疫组织化学染色阳性,Mallory染色胞浆蓝染.细胞-载体复合物扫描电镜观察:BMG结构符合细胞载体要求,细胞种植于BMG后生长良好.动物实验:大体观察A组术后8、12周缺损处均由透明软骨样组织修复,8周较12周表面稍凹陷;B、C组术后8、12周均为纤维样组织修复,表面凹凸不平.组织学观察HE染色A组术后8、12周修复组织与周围软骨组织结合良好,以圆形、椭圆形透明软骨样细胞为主,12周较8周细胞数多且大:B、C组均为纤维样组织修复,12周较8周纤维样组织增厚.Ⅱ型胶原免疫组织化学染色A组术后8周呈阳性、12周呈强阳性;B、C组均无表达.Wakitani评分术后8周A、B、C组分别为(3.50±1.51)、(10.00±1.41)、(12.00±0.93)分,术后12周分别为(1.13±0.99)、(8.38±1.30)、(10.13±1.64)分,A组优于B、C组,B组优于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 自体MSCs向软骨细胞方向诱导后,复合自体BMG对关节软骨缺损有较好的修复作用.
目的 研究兔MSCs嚮軟骨細胞方嚮誘導後複閤自體雙相骨基質明膠(bone matrix gelatin,BMG)對膝關節軟骨缺損的脩複作用.方法 健康成年新西蘭大白兔24隻,雌雄不限,體重2～3 kg,隨機分為A、B、C組,每組8隻.取A組骨髓行原代培養,胰酶消化按1:2比例傳至第5代,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態.取1、3、5代細胞繪製生長麯線.于第3代MSCs生長密集時加入TGF-a1 10 ng/mL、IGF-1 10 ng/mL、維生素C 50 ng/mL誘導8 d後倒置相差顯微鏡下觀察,爬片行免疫組織化學及Mallory染色.取A組髂骨按Urist方法 製備雙相BMG,將第3代經誘導8 d得到的種子細胞以5 X 106/mL密度接種于自體BMG製備細胞.載體複閤物,體外培養3 d後掃描電鏡觀察.製作膝關節軟骨直徑3 mm,深3 mm的缺損模型,A組植入自體細胞.載體複閤物,B組植入自體BMG,C組不作處理,第8、12週取材行大體觀察、HE染色、免疫組織化學染色觀察,Wakitani法組織學評分.結果 倒置相差顯微鏡觀察MSCs原代細胞呈短梭形;傳代細胞呈長梭形.傳代細胞1～3 d增殖緩慢,3 d後增殖旺盛,7～8 d進入平檯期,第3代增殖最為旺盛.誘導後MSCs細胞呈橢圓形,Ⅱ型膠原、S-100免疫組織化學染色暘性,Mallory染色胞漿藍染.細胞-載體複閤物掃描電鏡觀察:BMG結構符閤細胞載體要求,細胞種植于BMG後生長良好.動物實驗:大體觀察A組術後8、12週缺損處均由透明軟骨樣組織脩複,8週較12週錶麵稍凹陷;B、C組術後8、12週均為纖維樣組織脩複,錶麵凹凸不平.組織學觀察HE染色A組術後8、12週脩複組織與週圍軟骨組織結閤良好,以圓形、橢圓形透明軟骨樣細胞為主,12週較8週細胞數多且大:B、C組均為纖維樣組織脩複,12週較8週纖維樣組織增厚.Ⅱ型膠原免疫組織化學染色A組術後8週呈暘性、12週呈彊暘性;B、C組均無錶達.Wakitani評分術後8週A、B、C組分彆為(3.50±1.51)、(10.00±1.41)、(12.00±0.93)分,術後12週分彆為(1.13±0.99)、(8.38±1.30)、(10.13±1.64)分,A組優于B、C組,B組優于C組,差異均有統計學意義(P＜0.05).結論 自體MSCs嚮軟骨細胞方嚮誘導後,複閤自體BMG對關節軟骨缺損有較好的脩複作用.
목적 연구토MSCs향연골세포방향유도후복합자체쌍상골기질명효(bone matrix gelatin,BMG)대슬관절연골결손적수복작용.방법 건강성년신서란대백토24지,자웅불한,체중2～3 kg,수궤분위A、B、C조,매조8지.취A조골수행원대배양,이매소화안1:2비례전지제5대,도치상차현미경관찰세포형태.취1、3、5대세포회제생장곡선.우제3대MSCs생장밀집시가입TGF-a1 10 ng/mL、IGF-1 10 ng/mL、유생소C 50 ng/mL유도8 d후도치상차현미경하관찰,파편행면역조직화학급Mallory염색.취A조가골안Urist방법 제비쌍상BMG,장제3대경유도8 d득도적충자세포이5 X 106/mL밀도접충우자체BMG제비세포.재체복합물,체외배양3 d후소묘전경관찰.제작슬관절연골직경3 mm,심3 mm적결손모형,A조식입자체세포.재체복합물,B조식입자체BMG,C조불작처리,제8、12주취재행대체관찰、HE염색、면역조직화학염색관찰,Wakitani법조직학평분.결과 도치상차현미경관찰MSCs원대세포정단사형;전대세포정장사형.전대세포1～3 d증식완만,3 d후증식왕성,7～8 d진입평태기,제3대증식최위왕성.유도후MSCs세포정타원형,Ⅱ형효원、S-100면역조직화학염색양성,Mallory염색포장람염.세포-재체복합물소묘전경관찰:BMG결구부합세포재체요구,세포충식우BMG후생장량호.동물실험:대체관찰A조술후8、12주결손처균유투명연골양조직수복,8주교12주표면초요함;B、C조술후8、12주균위섬유양조직수복,표면요철불평.조직학관찰HE염색A조술후8、12주수복조직여주위연골조직결합량호,이원형、타원형투명연골양세포위주,12주교8주세포수다차대:B、C조균위섬유양조직수복,12주교8주섬유양조직증후.Ⅱ형효원면역조직화학염색A조술후8주정양성、12주정강양성;B、C조균무표체.Wakitani평분술후8주A、B、C조분별위(3.50±1.51)、(10.00±1.41)、(12.00±0.93)분,술후12주분별위(1.13±0.99)、(8.38±1.30)、(10.13±1.64)분,A조우우B、C조,B조우우C조,차이균유통계학의의(P＜0.05).결론 자체MSCs향연골세포방향유도후,복합자체BMG대관절연골결손유교호적수복작용.
