重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2009年
12期
1477-1479,Ⅱ
,共4页
熊刚%许雪青%陈雪丹%郭洪%李娟%王凯%蒋耀光
熊剛%許雪青%陳雪丹%郭洪%李娟%王凱%蔣耀光
웅강%허설청%진설단%곽홍%리연%왕개%장요광
DcR3%RNA干扰%慢病毒
DcR3%RNA榦擾%慢病毒
DcR3%RNA간우%만병독
目的 构建基于miR30的靶向DcR3慢病毒干扰载体.方法 人工设计针对DcR3编码区的干扰序列,使其转录后RNA结构类似于miR30结构,茎杆序列替换成DcR3 序列,送上海生物工程技术服务有限公司合成.以该序列为模板,分别利用携带EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物行PCR扩增,通过酶切连接的方式将插入片段连入p201慢病毒载体骨架中.经酶切和测序鉴定后,用包装质粒pMD2G及包膜质粒psAX2共同转染293FT细胞进行病毒包装.病毒包装上清液加入培养的人食管鳞癌细胞系KYSE150细胞中,用FACS分选后进行RT-PCR和Western blot检测DcR3表达情况.结果 构建了针对DcR3 的3条慢病毒干扰载体,成功包装出病毒,并不同程度地抑制了DcR3蛋白的表达.结论 基于miR-30的DcR3能有效抑制DcR3表达,为进一步研究DcR3 功能打下了基础.
目的 構建基于miR30的靶嚮DcR3慢病毒榦擾載體.方法 人工設計針對DcR3編碼區的榦擾序列,使其轉錄後RNA結構類似于miR30結構,莖桿序列替換成DcR3 序列,送上海生物工程技術服務有限公司閤成.以該序列為模闆,分彆利用攜帶EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位點的引物行PCR擴增,通過酶切連接的方式將插入片段連入p201慢病毒載體骨架中.經酶切和測序鑒定後,用包裝質粒pMD2G及包膜質粒psAX2共同轉染293FT細胞進行病毒包裝.病毒包裝上清液加入培養的人食管鱗癌細胞繫KYSE150細胞中,用FACS分選後進行RT-PCR和Western blot檢測DcR3錶達情況.結果 構建瞭針對DcR3 的3條慢病毒榦擾載體,成功包裝齣病毒,併不同程度地抑製瞭DcR3蛋白的錶達.結論 基于miR-30的DcR3能有效抑製DcR3錶達,為進一步研究DcR3 功能打下瞭基礎.
목적 구건기우miR30적파향DcR3만병독간우재체.방법 인공설계침대DcR3편마구적간우서렬,사기전록후RNA결구유사우miR30결구,경간서렬체환성DcR3 서렬,송상해생물공정기술복무유한공사합성.이해서렬위모판,분별이용휴대EcoRⅠ화XhoⅠ매절위점적인물행PCR확증,통과매절련접적방식장삽입편단련입p201만병독재체골가중.경매절화측서감정후,용포장질립pMD2G급포막질립psAX2공동전염293FT세포진행병독포장.병독포장상청액가입배양적인식관린암세포계KYSE150세포중,용FACS분선후진행RT-PCR화Western blot검측DcR3표체정황.결과 구건료침대DcR3 적3조만병독간우재체,성공포장출병독,병불동정도지억제료DcR3단백적표체.결론 기우miR-30적DcR3능유효억제DcR3표체,위진일보연구DcR3 공능타하료기출.
