海南医学
海南醫學
해남의학
HAINAN MEDICAL JOURNAL
2011年
5期
4-6
,共3页
PTPN1基因%siRNA%载体
PTPN1基因%siRNA%載體
PTPN1기인%siRNA%재체
目的 构建可沉默PTPN1基因的siRNA(siRNA)表达载体,并鉴定它对大鼠心肌细胞PTPN1基因的沉默率.方法 合成3对发夹siRNA模版寡核苷酸链,退火形成双链后插入pSilencer载体,构建成可沉默PTPN1基因的siRNA表达载体,通过酶切和测序鉴定构建的siRNA表达载体,并导入培养的大鼠心肌细胞,通过实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应和免疫印迹分析导入了siRNA表达载体的大鼠心肌细胞PTP1B的表达水平.结果 酶切鉴定和测序结果证实构建的3个siRNA表达载体构建正确.实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测显示构建的3个siRNA表达载体的干扰率分别为73.2%、84.7%及32.5%.它们的干扰效果被免疫印迹分析所证实.结论 干扰率为84.7%的表达载体为构建成功的siRNA表达载体,可用于心肌细胞PTPN1基因的功能研究.
目的 構建可沉默PTPN1基因的siRNA(siRNA)錶達載體,併鑒定它對大鼠心肌細胞PTPN1基因的沉默率.方法 閤成3對髮夾siRNA模版寡覈苷痠鏈,退火形成雙鏈後插入pSilencer載體,構建成可沉默PTPN1基因的siRNA錶達載體,通過酶切和測序鑒定構建的siRNA錶達載體,併導入培養的大鼠心肌細胞,通過實時熒光定量逆轉錄一聚閤酶鏈反應和免疫印跡分析導入瞭siRNA錶達載體的大鼠心肌細胞PTP1B的錶達水平.結果 酶切鑒定和測序結果證實構建的3箇siRNA錶達載體構建正確.實時熒光定量逆轉錄-聚閤酶鏈反應檢測顯示構建的3箇siRNA錶達載體的榦擾率分彆為73.2%、84.7%及32.5%.它們的榦擾效果被免疫印跡分析所證實.結論 榦擾率為84.7%的錶達載體為構建成功的siRNA錶達載體,可用于心肌細胞PTPN1基因的功能研究.
목적 구건가침묵PTPN1기인적siRNA(siRNA)표체재체,병감정타대대서심기세포PTPN1기인적침묵솔.방법 합성3대발협siRNA모판과핵감산련,퇴화형성쌍련후삽입pSilencer재체,구건성가침묵PTPN1기인적siRNA표체재체,통과매절화측서감정구건적siRNA표체재체,병도입배양적대서심기세포,통과실시형광정량역전록일취합매련반응화면역인적분석도입료siRNA표체재체적대서심기세포PTP1B적표체수평.결과 매절감정화측서결과증실구건적3개siRNA표체재체구건정학.실시형광정량역전록-취합매련반응검측현시구건적3개siRNA표체재체적간우솔분별위73.2%、84.7%급32.5%.타문적간우효과피면역인적분석소증실.결론 간우솔위84.7%적표체재체위구건성공적siRNA표체재체,가용우심기세포PTPN1기인적공능연구.
