CAJ | 학술논문

[目的]制备抗人甲状腺素多克隆抗体并应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立非均衡竞争FT4化学发光法.[方法]以T4-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰兔,制备抗人T4多克隆抗体,亲和层析法吸附掉与3-碘-L-甲状腺原氨酸(3-iodo-L-tyrosine)、3,5-二碘-L-甲状腺原氨酸(3,5-diiodo-L-tyrosine)、D-三碘甲状腺原氨酸(D-T3)、L-三碘甲状腺原氨酸(L-T3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)有交叉反应多抗,纯化特异性的抗人T4多克隆抗体并用FITC标记T4类似物,用抗FITC抗体包被微孔板.反应时,将FT4校准品或样品、FITC-T4类似物、T4抗体-HRP依次加入包被有抗FTTC抗体的化学发光板中,FITC -T4类似物与FT4校准品或样品,非均衡竞争结合T4抗体-HRP,从而在微孔板上形成免疫反应复合物T4类似物-T4抗体-HRP,通过酶促化学发光反应,就可以显示出与样品FT4浓度负相关的相对光单位(relative light unit,RLU),建立FT4化学发光检测方法.[结果]抗体经酶联免疫吸附实验证明对T4具有高度特异性,与3-iodo-L-tyrosine、3,5-diiodo-L-tyrosine、L-T3、D-T3、rT3无交叉反应.该方法建立的试剂盒标准曲线的线性相关系数不小于0.9900;分析灵敏度为0.9 pmol/L;线性检测范围0.9～130 pmol/L;精密度测试批内变异系数CV＜ 10％;与进口发光免疫分析系统做线性相关比较,线性回归系数为1.0852,相关系数为0.9673,临床符合率良好；本方法建立的试剂盒经加速稳定性试验37℃放置7d与2～8℃放置7d无异.[结论]综上所述,应用FITC系统建立的非均衡竞争FT4化学发光免疫分析灵敏度高、特异性好适于临床诊断应用.
[목적]제비항인갑상선소다극륭항체병응용이류청산형광소(fluorescein isothiocyanate,FITC)계통건립비균형경쟁FT4화학발광법.[방법]이T4-우혈청백단백(bovin serum albumin,BSA)위항원면역신서란토,제비항인T4다극륭항체,친화층석법흡부도여3-전-L-갑상선원안산(3-iodo-L-tyrosine)、3,5-이전-L-갑상선원안산(3,5-diiodo-L-tyrosine)、D-삼전갑상선원안산(D-T3)、L-삼전갑상선원안산(L-T3)、반삼전갑상선원안산(rT3)유교차반응다항,순화특이성적항인T4다극륭항체병용FITC표기T4유사물,용항FITC항체포피미공판.반응시,장FT4교준품혹양품、FITC-T4유사물、T4항체-HRP의차가입포피유항FTTC항체적화학발광판중,FITC -T4유사물여FT4교준품혹양품,비균형경쟁결합T4항체-HRP,종이재미공판상형성면역반응복합물T4유사물-T4항체-HRP,통과매촉화학발광반응,취가이현시출여양품FT4농도부상관적상대광단위(relative light unit,RLU),건립FT4화학발광검측방법.[결과]항체경매련면역흡부실험증명대T4구유고도특이성,여3-iodo-L-tyrosine、3,5-diiodo-L-tyrosine、L-T3、D-T3、rT3무교차반응.해방법건립적시제합표준곡선적선성상관계수불소우0.9900;분석령민도위0.9 pmol/L;선성검측범위0.9～130 pmol/L;정밀도측시비내변이계수CV＜ 10％;여진구발광면역분석계통주선성상관비교,선성회귀계수위1.0852,상관계수위0.9673,림상부합솔량호；본방법건립적시제합경가속은정성시험37℃방치7d여2～8℃방치7d무이.[결론]종상소술,응용FITC계통건립적비균형경쟁FT4화학발광면역분석령민도고、특이성호괄우림상진단응용.