现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2012年
3期
26-29
,共4页
刘爱玲%陆学东%吴润香%贾雪
劉愛玲%陸學東%吳潤香%賈雪
류애령%륙학동%오윤향%가설
人偏肺病毒%亚克隆%长片段RT-PCR%重组质粒
人偏肺病毒%亞剋隆%長片段RT-PCR%重組質粒
인편폐병독%아극륭%장편단RT-PCR%중조질립
目的 从临床标本中扩增人偏肺病毒(hMPV)基因片段进行亚克隆,为进一步全面深入地研究人偏肺病毒奠定基础.方法 根据GenBank中已知的hMPV全基因序列设计引物.收集呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物697例,提取病毒核酸,运用长片段RT-PCR技术扩增目的片段,切割含目的条带的凝胶进行纯化,并将目的片段连接到PJET1.2/blunt克隆载体,转化感受态细胞TOP10,经含氨苄青霉素的抗生素平板筛选,得到阳性克隆,提取质粒,最后对重组质粒进行PCR鉴定和测序鉴定.结果 随机选取5例所获的阳性条带经PCR和测序鉴定,证实确为hMPV基因片段.结论 成功构建了hMPV基因组亚克隆,可用于后续的实验研究.
目的 從臨床標本中擴增人偏肺病毒(hMPV)基因片段進行亞剋隆,為進一步全麵深入地研究人偏肺病毒奠定基礎.方法 根據GenBank中已知的hMPV全基因序列設計引物.收集呼吸道感染住院患兒鼻嚥抽吸物697例,提取病毒覈痠,運用長片段RT-PCR技術擴增目的片段,切割含目的條帶的凝膠進行純化,併將目的片段連接到PJET1.2/blunt剋隆載體,轉化感受態細胞TOP10,經含氨芐青黴素的抗生素平闆篩選,得到暘性剋隆,提取質粒,最後對重組質粒進行PCR鑒定和測序鑒定.結果 隨機選取5例所穫的暘性條帶經PCR和測序鑒定,證實確為hMPV基因片段.結論 成功構建瞭hMPV基因組亞剋隆,可用于後續的實驗研究.
목적 종림상표본중확증인편폐병독(hMPV)기인편단진행아극륭,위진일보전면심입지연구인편폐병독전정기출.방법 근거GenBank중이지적hMPV전기인서렬설계인물.수집호흡도감염주원환인비인추흡물697례,제취병독핵산,운용장편단RT-PCR기술확증목적편단,절할함목적조대적응효진행순화,병장목적편단련접도PJET1.2/blunt극륭재체,전화감수태세포TOP10,경함안변청매소적항생소평판사선,득도양성극륭,제취질립,최후대중조질립진행PCR감정화측서감정.결과 수궤선취5례소획적양성조대경PCR화측서감정,증실학위hMPV기인편단.결론 성공구건료hMPV기인조아극륭,가용우후속적실험연구.
