科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2005年
1期
45-49
,共5页
吕文平%许梓荣%孙建义%李卫芬%杜文理
呂文平%許梓榮%孫建義%李衛芬%杜文理
려문평%허재영%손건의%리위분%두문리
动物营养与饲料科学%β-葡聚糖酶%嗜热梭菌%克隆%大肠杆菌%表达
動物營養與飼料科學%β-葡聚糖酶%嗜熱梭菌%剋隆%大腸桿菌%錶達
동물영양여사료과학%β-포취당매%기열사균%극륭%대장간균%표체
提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040 bp,ORF为1003 bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8 kD,等电点为7.67.经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318).用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET-clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在37 kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4 U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右.该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌.
提取嗜熱梭菌(Clostridium.sp)基因組DNA,首次通過PCR剋隆瞭該菌的β-葡聚糖酶基因全長,結果錶明:該基因全長1040 bp,ORF為1003 bp,編碼334箇氨基痠,計算分子量為37.8 kD,等電點為7.67.經Blast分析,該序列與熱纖梭菌同源性最高(99%),而與基因庫中嗜熱梭菌的同源性為94%,該基因已被GenBank接受(AY225318).用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切目的片段和錶達載體pET-30a(+)後相連接,構建重組錶達載體pET-clo,併導入BL21細菌中錶達.酶學特性錶明:SDS-PAGE電泳在37 kD左右有錶達蛋白帶,該工程菌最適酶活29.4 U/mL,是齣髮菌的15倍,最適溫度在80℃左右,最適pH在9左右.該工程菌可構建耐熱性好、酶活高的雜閤基因工程菌.
제취기열사균(Clostridium.sp)기인조DNA,수차통과PCR극륭료해균적β-포취당매기인전장,결과표명:해기인전장1040 bp,ORF위1003 bp,편마334개안기산,계산분자량위37.8 kD,등전점위7.67.경Blast분석,해서렬여열섬사균동원성최고(99%),이여기인고중기열사균적동원성위94%,해기인이피GenBank접수(AY225318).용BamH Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절목적편단화표체재체pET-30a(+)후상련접,구건중조표체재체pET-clo,병도입BL21세균중표체.매학특성표명:SDS-PAGE전영재37 kD좌우유표체단백대,해공정균최괄매활29.4 U/mL,시출발균적15배,최괄온도재80℃좌우,최괄pH재9좌우.해공정균가구건내열성호、매활고적잡합기인공정균.
