动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2007年
8期
13-17
,共5页
孙彦伟%刘建营%徐维加%田云%王晶钰%宋长绪
孫彥偉%劉建營%徐維加%田雲%王晶鈺%宋長緒
손언위%류건영%서유가%전운%왕정옥%송장서
日本脑炎病毒%荧光定量PCR%TaqMan探针
日本腦炎病毒%熒光定量PCR%TaqMan探針
일본뇌염병독%형광정량PCR%TaqMan탐침
通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量R-PCR的1对引物和1条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%.对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度.
通過RT-PCR方法剋隆瞭日本腦炎病毒(JEV)N基因片段序列,構建重組質粒作為標準暘性模闆,同時根據GenBank中的靶序列設計瞭熒光定量R-PCR的1對引物和1條TaqMan探針.通過條件優化,以定量的10倍繫列稀釋的質粒為標準品進行熒光定量PCR擴增併製作標準麯線,建立瞭JEV檢測的熒光定量PCR方法.結果錶明,該方法檢測靈敏度可達1.0×100拷貝/μL,線性範圍為109～100,達10箇數量級;對起始濃度為1.0×109、1.0×108和1.0×107拷貝/μL的標準品的最終實際測得值(Ct)分彆為17.33、20.52和23.90,變異繫數分彆為0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%.對暘性組織病料的檢測錶明該方法的靈敏度高齣常規PCR,與套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的靈敏度.
통과RT-PCR방법극륭료일본뇌염병독(JEV)N기인편단서렬,구건중조질립작위표준양성모판,동시근거GenBank중적파서렬설계료형광정량R-PCR적1대인물화1조TaqMan탐침.통과조건우화,이정량적10배계렬희석적질립위표준품진행형광정량PCR확증병제작표준곡선,건립료JEV검측적형광정량PCR방법.결과표명,해방법검측령민도가체1.0×100고패/μL,선성범위위109～100,체10개수량급;대기시농도위1.0×109、1.0×108화1.0×107고패/μL적표준품적최종실제측득치(Ct)분별위17.33、20.52화23.90,변이계수분별위0.54%、0.74%화0.53%,균소우5%.대양성조직병료적검측표명해방법적령민도고출상규PCR,여투식PCR(nested-PCR,nPCR)구유상근적령민도.
