CAJ | 학술논문

目的:观察由缺氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统对乏氧环境中的人肺腺癌细胞系A549细胞的杀伤作用.方法:将HRE调控HSV-TK和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双基因共表达的真核载体pHRE-TK通过脂质体导入A549细胞,分别在乏氧(O2浓度为3%)和常氧(O2浓度为21%)环境中培养,荧光显微镜观察重组载体转染A549细胞后报告基因EGFP表达变化,并进行荧光光密度(FOD)分析;再予以GCV处理5 d后,用MTT法检测GCV对培养细胞的杀伤效果.设立分别仅含有HRE、HSV-TK以及两者均无的3个荧光表达载体(pHRE、pTK、pEGFP)为对照组.结果:在乏氧环境中,由HRE调控的重组载体pHRE-TK和pHRE转染A549细胞后,其FOD值高于无HRE调控的载体pTK和pEGFP转染组P＜0.01;而在常氧环境中各组细胞之间FOD值差异无统计学意义,P＞0.05.携带HSV-TK基因的重组载体pHRE-TK和pTK转染A549细胞后,细胞对GCV的敏感性均高于无HSV-TK基因的pHRE组细胞,P＜0.01;敏感性随GCV浓度增加而增大.在乏氧环境中培养的pHRE-TK组细胞对GCV的敏感性高于pTK组(P＜0.01),亦高于在常氧环境中培养的pHRE-TK组细胞,P＜0.01;而在常氧环境中,pHRE-TK组与pTK组细胞对GCV的敏感性差异无统计学意义,P＞0.05.结论:在乏氧的A549细胞内,HRE使报告基因EGFP表达增强;HRE能增强HSV-TK/ GCV系统对乏氧环境中的A549细胞的杀伤效率.
목적:관찰유결양반응원건(HRE)조공적단순포진병독흉감격매/병양조감(HSV-TK/GCV)계통대핍양배경중적인폐선암세포계A549세포적살상작용.방법:장HRE조공HSV-TK화증강형록색형광단백(EGFP)쌍기인공표체적진핵재체pHRE-TK통과지질체도입A549세포,분별재핍양(O2농도위3%)화상양(O2농도위21%)배경중배양,형광현미경관찰중조재체전염A549세포후보고기인EGFP표체변화,병진행형광광밀도(FOD)분석;재여이GCV처리5 d후,용MTT법검측GCV대배양세포적살상효과.설립분별부함유HRE、HSV-TK이급량자균무적3개형광표체재체(pHRE、pTK、pEGFP)위대조조.결과:재핍양배경중,유HRE조공적중조재체pHRE-TK화pHRE전염A549세포후,기FOD치고우무HRE조공적재체pTK화pEGFP전염조P＜0.01;이재상양배경중각조세포지간FOD치차이무통계학의의,P＞0.05.휴대HSV-TK기인적중조재체pHRE-TK화pTK전염A549세포후,세포대GCV적민감성균고우무HSV-TK기인적pHRE조세포,P＜0.01;민감성수GCV농도증가이증대.재핍양배경중배양적pHRE-TK조세포대GCV적민감성고우pTK조(P＜0.01),역고우재상양배경중배양적pHRE-TK조세포,P＜0.01;이재상양배경중,pHRE-TK조여pTK조세포대GCV적민감성차이무통계학의의,P＞0.05.결론:재핍양적A549세포내,HRE사보고기인EGFP표체증강;HRE능증강HSV-TK/ GCV계통대핍양배경중적A549세포적살상효솔.