第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2008年
8期
694-697
,共4页
臧家涛%李淑慧%李鹏%陈安%胡川闽
臧傢濤%李淑慧%李鵬%陳安%鬍川閩
장가도%리숙혜%리붕%진안%호천민
DNA shuffling%巨噬细胞移动抑制因子%CD74%噬菌体展示技术%MHC Ⅱ恒定链
DNA shuffling%巨噬細胞移動抑製因子%CD74%噬菌體展示技術%MHC Ⅱ恆定鏈
DNA shuffling%거서세포이동억제인자%CD74%서균체전시기술%MHC Ⅱ항정련
目的 利用DNA shuffling技术,结合17噬菌体表面展示技术,定向进化MIF受体sCD74.以获得高亲和力突变体基因.方法 定点突变的牛、小鼠、人CD74胞外同源区基因以Dnase Ⅰ消化,回收25-50 bp片段进行DNA shuff-ling;将500 bp shuffling产物经限制性酶切后与T7噬菌体DNA连接,与17 package extracts组建噬菌体文库;采用竞争淘洗方法进行5轮筛选,富集得到高亲和力结合MIF的噬菌体;挑取20株噬菌体单克隆进行基因克隆并测序,对测序结果进行生物信息学分析,同时以竞争ELISA初步鉴定进化效果.结果 20株噬菌体单克隆具有相同的sCD74突变基因.为相同克隆,将此克隆命名为sHCD74m,其基因命名为sHCD74mD;竞争性ELISA分析显示其MIF结合力提高.结论 得到了与MIF高亲和力结合的sCD74突变体基因sHCD74mD.
目的 利用DNA shuffling技術,結閤17噬菌體錶麵展示技術,定嚮進化MIF受體sCD74.以穫得高親和力突變體基因.方法 定點突變的牛、小鼠、人CD74胞外同源區基因以Dnase Ⅰ消化,迴收25-50 bp片段進行DNA shuff-ling;將500 bp shuffling產物經限製性酶切後與T7噬菌體DNA連接,與17 package extracts組建噬菌體文庫;採用競爭淘洗方法進行5輪篩選,富集得到高親和力結閤MIF的噬菌體;挑取20株噬菌體單剋隆進行基因剋隆併測序,對測序結果進行生物信息學分析,同時以競爭ELISA初步鑒定進化效果.結果 20株噬菌體單剋隆具有相同的sCD74突變基因.為相同剋隆,將此剋隆命名為sHCD74m,其基因命名為sHCD74mD;競爭性ELISA分析顯示其MIF結閤力提高.結論 得到瞭與MIF高親和力結閤的sCD74突變體基因sHCD74mD.
목적 이용DNA shuffling기술,결합17서균체표면전시기술,정향진화MIF수체sCD74.이획득고친화력돌변체기인.방법 정점돌변적우、소서、인CD74포외동원구기인이Dnase Ⅰ소화,회수25-50 bp편단진행DNA shuff-ling;장500 bp shuffling산물경한제성매절후여T7서균체DNA련접,여17 package extracts조건서균체문고;채용경쟁도세방법진행5륜사선,부집득도고친화력결합MIF적서균체;도취20주서균체단극륭진행기인극륭병측서,대측서결과진행생물신식학분석,동시이경쟁ELISA초보감정진화효과.결과 20주서균체단극륭구유상동적sCD74돌변기인.위상동극륭,장차극륭명명위sHCD74m,기기인명명위sHCD74mD;경쟁성ELISA분석현시기MIF결합력제고.결론 득도료여MIF고친화력결합적sCD74돌변체기인sHCD74mD.
