重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2008年
12期
1427-1430
,共4页
卫佳%王胜%苗静琨%陈英华%李星星%吴丽美%左国伟%何通川%周兰
衛佳%王勝%苗靜琨%陳英華%李星星%吳麗美%左國偉%何通川%週蘭
위가%왕성%묘정곤%진영화%리성성%오려미%좌국위%하통천%주란
人S100A2-GST融合蛋白%诱导表达%蛋白纯化%蛋白鉴定
人S100A2-GST融閤蛋白%誘導錶達%蛋白純化%蛋白鑒定
인S100A2-GST융합단백%유도표체%단백순화%단백감정
目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础.方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose 4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量.结果:Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300 bp和5 kb,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36 kD的蛋白,产率达5 mg/L菌液;Glutathion-Scpharose 4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;Western Blot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白.结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose 4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白.为后续有关hS100A2的研究打下了基础.
目的:製備人S100A2-GST融閤蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),為進一步研究人hS100A2蛋白的功能及其與其它因子或繫統的相互作用奠定基礎.方法:從pHAHA-hS100A2中雙酶切穫取hS100A2基因,亞剋隆至原覈錶達載體pGST-moluc,構建pGST-moluc-hS100A2,轉化BL21後酶切鑒定,IPTG誘導重組菌錶達融閤蛋白hS100A2-GST,再經過Glutathion-Sepharose 4B毬珠分離純化、SDS-PAGE及Western Blot鑒定,Bradford法蛋白定量.結果:Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ雙酶切該重組質粒後穫得2箇片段,分彆約300 bp和5 kb,提示pGST-moluc-hS100A2構建正確;重組菌株經過IPTG誘導後,錶達分子量約為36 kD的蛋白,產率達5 mg/L菌液;Glutathion-Scpharose 4B毬珠純化後,該融和蛋白純度達92%;Western Blot顯示該蛋白可以被S100A2的抗體特異識彆,證實其為hS100A2-GST融閤蛋白.結論:成功構建瞭hS100A2-GST原覈錶達質粒pGST-moluc-hS100A2;該質粒可在大腸桿菌中誘導錶達hS100A2-GST融閤蛋白,產率高;應用Glutathion-Sepharose 4B毬珠可穫得純度達92%的該蛋白.為後續有關hS100A2的研究打下瞭基礎.
목적:제비인S100A2-GST융합단백(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),위진일보연구인hS100A2단백적공능급기여기타인자혹계통적상호작용전정기출.방법:종pHAHA-hS100A2중쌍매절획취hS100A2기인,아극륭지원핵표체재체pGST-moluc,구건pGST-moluc-hS100A2,전화BL21후매절감정,IPTG유도중조균표체융합단백hS100A2-GST,재경과Glutathion-Sepharose 4B구주분리순화、SDS-PAGE급Western Blot감정,Bradford법단백정량.결과:Xho Ⅰ화EcoR Ⅰ쌍매절해중조질립후획득2개편단,분별약300 bp화5 kb,제시pGST-moluc-hS100A2구건정학;중조균주경과IPTG유도후,표체분자량약위36 kD적단백,산솔체5 mg/L균액;Glutathion-Scpharose 4B구주순화후,해융화단백순도체92%;Western Blot현시해단백가이피S100A2적항체특이식별,증실기위hS100A2-GST융합단백.결론:성공구건료hS100A2-GST원핵표체질립pGST-moluc-hS100A2;해질립가재대장간균중유도표체hS100A2-GST융합단백,산솔고;응용Glutathion-Sepharose 4B구주가획득순도체92%적해단백.위후속유관hS100A2적연구타하료기출.
