CAJ | 학술논문

目的制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体, 对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用. 方法利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列.应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274～291个氨基酸多肽(接近C端), 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体.用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价.通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位. 结果化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20,第274～291个氨基酸多肽, 纯化后两条多肽纯度都达到90%以上, 符合免疫用抗原标准.将多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1∶64 000 和 1∶128 000.应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核. Western blot 研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白. 结论所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究.LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持.
목적 제비대서정자발생상관단백LM23적합성태다극륭항체, 대기특성진행초보감정,병대LM23다극륭항체진행초보응용. 방법 이용생물신식학방법분석선택LM23단백적다태서렬.응용Fmoc법화학합성대서LM23단백N단제1～20화제274～291개안기산다태(접근C단), 경C18적RP-HPLC순화후, 통과고전산납법,장순화적LM23단백적다태여KLH교련,면역신서란대이백토,획득LM23단백적다극륭항체.용ELISA방법감정다극륭항체효개.통과Western blot방법감정LM23다극륭항체적특이성병연구LM23재대서고환중적표체;통과면역조화방법연구LM23재대서고환조직화세포중적정위. 결과 화학Fmoc법분별합성대서LM23단백N단제1～20,제274～291개안기산다태, 순화후량조다태순도도체도90%이상, 부합면역용항원표준.장다태여KLH교련, 용우면역동물.경ELISA감정,량충다극륭항체적효개분별체도1∶64 000 화 1∶128 000.응용대서고환조직절편진행LM23-18태다극륭항체적면역조직화학연구,발현정모세포유양성과립반응,차LM23주요표체우세포핵. Western blot 연구증실,LM23-18태다극륭항체가특이식별대서고환조직중상대분자량(Mr)약위36 kD적LM23단백. 결론 소제비적LM23합성태다극륭항체가용우ELISA、Western blot급면역조화연구.LM23합성태다극륭항체적제비위진일보연구LM23적공능화작용궤제제공료유력지지.