中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2010年
8期
1079-1084
,共6页
张阳%张志坚%杨光华%俞晓岚%黄志新%吴秀丽
張暘%張誌堅%楊光華%俞曉嵐%黃誌新%吳秀麗
장양%장지견%양광화%유효람%황지신%오수려
胶质细胞源性神经营养因子%酪氨酸羟化酶%慢病毒载体%基因克隆%Tet-On系统%可调控表达
膠質細胞源性神經營養因子%酪氨痠羥化酶%慢病毒載體%基因剋隆%Tet-On繫統%可調控錶達
효질세포원성신경영양인자%락안산간화매%만병독재체%기인극륭%Tet-On계통%가조공표체
目的 采用改良的Tet-On四环素可调控系统,构建携带大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因和酪氨酸羟化酶(TH)双基因的慢病毒载体,观察四环素类抗生素对GDNF、TH基因的表达调控.方法 PCR方法获得大鼠 GDNF、TH基因,将其克隆至改良的Tet-On四环素调控慢病毒载体.通过瞬间转染法包装出病毒上清,用实时荧光定量PCR鉴定滴度.将包装的慢病毒-TH-GDNF与rtTA2S-M2以相同感染复数(MOI)感染293 T细胞,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测强力霉素对 GDNF、TH 基因 mRNA和蛋白的表达调控.结果 实验成功构建重组慢病毒载体质粒;生产的病毒浓缩后滴度为2.1×1011 TU · L-1;感染293 T细胞实时荧光定量PCR和免疫印迹显示强力霉素阳性组可见GDNF、TH基因mRNA表达明显升高(P<0.01)和蛋白条带,阴性组未见.结论 在改良的Tet-On调控系统的慢病毒载体上成功克隆大鼠GDNF、TH双基因,其表达受四环素类抗生素调控并未见背景效应.
目的 採用改良的Tet-On四環素可調控繫統,構建攜帶大鼠膠質細胞源性神經營養因子(GDNF)基因和酪氨痠羥化酶(TH)雙基因的慢病毒載體,觀察四環素類抗生素對GDNF、TH基因的錶達調控.方法 PCR方法穫得大鼠 GDNF、TH基因,將其剋隆至改良的Tet-On四環素調控慢病毒載體.通過瞬間轉染法包裝齣病毒上清,用實時熒光定量PCR鑒定滴度.將包裝的慢病毒-TH-GDNF與rtTA2S-M2以相同感染複數(MOI)感染293 T細胞,實時熒光定量PCR和免疫印跡法檢測彊力黴素對 GDNF、TH 基因 mRNA和蛋白的錶達調控.結果 實驗成功構建重組慢病毒載體質粒;生產的病毒濃縮後滴度為2.1×1011 TU · L-1;感染293 T細胞實時熒光定量PCR和免疫印跡顯示彊力黴素暘性組可見GDNF、TH基因mRNA錶達明顯升高(P<0.01)和蛋白條帶,陰性組未見.結論 在改良的Tet-On調控繫統的慢病毒載體上成功剋隆大鼠GDNF、TH雙基因,其錶達受四環素類抗生素調控併未見揹景效應.
목적 채용개량적Tet-On사배소가조공계통,구건휴대대서효질세포원성신경영양인자(GDNF)기인화락안산간화매(TH)쌍기인적만병독재체,관찰사배소류항생소대GDNF、TH기인적표체조공.방법 PCR방법획득대서 GDNF、TH기인,장기극륭지개량적Tet-On사배소조공만병독재체.통과순간전염법포장출병독상청,용실시형광정량PCR감정적도.장포장적만병독-TH-GDNF여rtTA2S-M2이상동감염복수(MOI)감염293 T세포,실시형광정량PCR화면역인적법검측강력매소대 GDNF、TH 기인 mRNA화단백적표체조공.결과 실험성공구건중조만병독재체질립;생산적병독농축후적도위2.1×1011 TU · L-1;감염293 T세포실시형광정량PCR화면역인적현시강력매소양성조가견GDNF、TH기인mRNA표체명현승고(P<0.01)화단백조대,음성조미견.결론 재개량적Tet-On조공계통적만병독재체상성공극륭대서GDNF、TH쌍기인,기표체수사배소류항생소조공병미견배경효응.
