CAJ | 학술논문

以旱柳Salix matsudana及东南景天Sedum alfredii为实验材料,利用改进的SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术分别构建了旱柳盐胁迫和东南景天氯化镉胁迫后的全长cDNA文库,把文库包装到酵母表达载体中,转化酿酒酵母感受态细胞,通过在尿嘧啶缺陷型培养基上添加不同浓度梯度的筛选压来筛选酵母高抗转化子,并对其基因进行鉴定.结果从旱柳盐胁迫全长cDNA文库中得到了2个能耐受1.709 mol·L-1氯化钠的阳性转化子,从东南景天氯化镉胁迫全长cDNA丈库中得到了2个能耐受0.123 mmol·L-1氯化镉的阳性转化子.分别测定对照菌(转空载体重组菌INV/p YES2.1)和转cDNA重组菌在无胁迫、高盐(1 mol·L-1氯化钠)和高氯化镉(150 μmol·L-1)胁迫下的生长曲线.结果表明高耐盐/耐镉相关基因的表达对酵母正常生长没有影响.在含高盐或者高镉的培养基里,2个转基因重组菌的延滞期短于对照菌.这表明高耐盐/耐镉相关基因的表达可以提高酵母细胞的耐盐/耐镉能力.对6号耐盐转化子序列进行生物信息学和表达模式分析,发现该基因为一盐胁迫应答相关基因SMpla6(暂定名).用酿酒酵母建立了一个高效快速筛选植物抗逆基因的体系,研究结果为快速克隆植物抗逆相关基因奠定基础.
이한류Salix matsudana급동남경천Sedum alfredii위실험재료,이용개진적SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)기술분별구건료한류염협박화동남경천록화력협박후적전장cDNA문고,파문고포장도효모표체재체중,전화양주효모감수태세포,통과재뇨밀정결함형배양기상첨가불동농도제도적사선압래사선효모고항전화자,병대기기인진행감정.결과종한류염협박전장cDNA문고중득도료2개능내수1.709 mol·L-1록화납적양성전화자,종동남경천록화력협박전장cDNA장고중득도료2개능내수0.123 mmol·L-1록화력적양성전화자.분별측정대조균(전공재체중조균INV/p YES2.1)화전cDNA중조균재무협박、고염(1 mol·L-1록화납)화고록화력(150 μmol·L-1)협박하적생장곡선.결과표명고내염/내력상관기인적표체대효모정상생장몰유영향.재함고염혹자고력적배양기리,2개전기인중조균적연체기단우대조균.저표명고내염/내력상관기인적표체가이제고효모세포적내염/내력능력.대6호내염전화자서렬진행생물신식학화표체모식분석,발현해기인위일염협박응답상관기인SMpla6(잠정명).용양주효모건립료일개고효쾌속사선식물항역기인적체계,연구결과위쾌속극륭식물항역상관기인전정기출.