军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2012年
4期
304-308
,共5页
高兴%曲险峰%孙伟%李华宇%辛文文%李箐%王景林
高興%麯險峰%孫偉%李華宇%辛文文%李箐%王景林
고흥%곡험봉%손위%리화우%신문문%리정%왕경림
细菌%基因芯片%特异基因%随机聚合酶链反应
細菌%基因芯片%特異基因%隨機聚閤酶鏈反應
세균%기인심편%특이기인%수궤취합매련반응
目的 建立一种基于随机聚合酶链反应的病原细菌基因芯片筛查检测技术.方法 用生物学软件分析7种病原菌特异性基因序列的保守性区域,利用Oligo 6.0软件设计针对靶细菌的一系列探针,制备检测用基因芯片.细菌基因组DNA在随机引物扩增中掺入氨基丙烯-dUTP,产物偶联荧光染料后与芯片上探针杂交,通过芯片扫描仪和图像分析软件对结果进行判断.选取19种病原菌基因组DNA进行芯片特异性验证和灵敏度评价,使用问号钩端螺旋体对应靶探针进行基因芯片检测方法重复性验证,并制备问号钩端螺旋体模拟水污染样本进行芯片检测.结果 在均一的杂交条件下4种靶细菌均能得到相应特异性杂交图谱,其他非目的 细菌均为阴性结果,3种靶细菌基因组DNA最低检测浓度为14.43～363.4 pg/μl,芯片重复性变异系数CV值＜15%,最低可检测含问号钩端螺旋体7×105条/ml模拟水污染样本.结论 初步建立的随机聚合酶链反应结合芯片技术的检测方法可用于多种病原菌筛查检测,为细菌高通量筛查与鉴定技术提供了新的思路和实验依据.
目的 建立一種基于隨機聚閤酶鏈反應的病原細菌基因芯片篩查檢測技術.方法 用生物學軟件分析7種病原菌特異性基因序列的保守性區域,利用Oligo 6.0軟件設計針對靶細菌的一繫列探針,製備檢測用基因芯片.細菌基因組DNA在隨機引物擴增中摻入氨基丙烯-dUTP,產物偶聯熒光染料後與芯片上探針雜交,通過芯片掃描儀和圖像分析軟件對結果進行判斷.選取19種病原菌基因組DNA進行芯片特異性驗證和靈敏度評價,使用問號鉤耑螺鏇體對應靶探針進行基因芯片檢測方法重複性驗證,併製備問號鉤耑螺鏇體模擬水汙染樣本進行芯片檢測.結果 在均一的雜交條件下4種靶細菌均能得到相應特異性雜交圖譜,其他非目的 細菌均為陰性結果,3種靶細菌基因組DNA最低檢測濃度為14.43～363.4 pg/μl,芯片重複性變異繫數CV值＜15%,最低可檢測含問號鉤耑螺鏇體7×105條/ml模擬水汙染樣本.結論 初步建立的隨機聚閤酶鏈反應結閤芯片技術的檢測方法可用于多種病原菌篩查檢測,為細菌高通量篩查與鑒定技術提供瞭新的思路和實驗依據.
목적 건립일충기우수궤취합매련반응적병원세균기인심편사사검측기술.방법 용생물학연건분석7충병원균특이성기인서렬적보수성구역,이용Oligo 6.0연건설계침대파세균적일계렬탐침,제비검측용기인심편.세균기인조DNA재수궤인물확증중참입안기병희-dUTP,산물우련형광염료후여심편상탐침잡교,통과심편소묘의화도상분석연건대결과진행판단.선취19충병원균기인조DNA진행심편특이성험증화령민도평개,사용문호구단라선체대응파탐침진행기인심편검측방법중복성험증,병제비문호구단라선체모의수오염양본진행심편검측.결과 재균일적잡교조건하4충파세균균능득도상응특이성잡교도보,기타비목적 세균균위음성결과,3충파세균기인조DNA최저검측농도위14.43～363.4 pg/μl,심편중복성변이계수CV치＜15%,최저가검측함문호구단라선체7×105조/ml모의수오염양본.결론 초보건립적수궤취합매련반응결합심편기술적검측방법가용우다충병원균사사검측,위세균고통량사사여감정기술제공료신적사로화실험의거.
