中国临床新医学
中國臨床新醫學
중국림상신의학
CHINESE JOURNAL OF NEW CLINICAL MEDICINE
2012年
4期
281-284
,共4页
孔凡彪%王晓通%韦尉元%罗文%肖强
孔凡彪%王曉通%韋尉元%囉文%肖彊
공범표%왕효통%위위원%라문%초강
E2F-1%Rb蛋白%去磷酸化%siRNA%胃癌
E2F-1%Rb蛋白%去燐痠化%siRNA%胃癌
E2F-1%Rb단백%거린산화%siRNA%위암
目的 应用RNA干扰技术研究E2F-1基因沉默在人胃癌MGC803细胞中对Rb蛋白表达的影响.方法 将重组质粒E2F-1-siRNA转染MGC803细胞,筛选稳定株,利用RT-PCR检测转染前后细胞E2F-1 mRNA表达水平,并通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测各组细胞E2F-1蛋白的表达水平来验证质粒转入胃癌细胞的情况.采用Western blot检测三组细胞中总Rb蛋白和磷酸化Rb蛋白的表达情况,计算出非磷酸化Rb蛋白表达情况,统计各组间的差异.结果 重组质粒E2F-1-siRNA成功转入胃癌细胞中;有效抑制了E2F-1 mRNA的表达,E2F-1蛋白水平显著下降,与阴性对照组及未转染组相比分别降低了83.2%和84.6%,去磷酸化Rb蛋白分别增加了61.22%(P<0.05)和66.60%(P<0.05),差异有统计学意义.结论 沉默表达E2F-1基因后,可以有效降低Rb蛋白的水平,促进其活化形式去磷酸化Rb蛋白的产生.
目的 應用RNA榦擾技術研究E2F-1基因沉默在人胃癌MGC803細胞中對Rb蛋白錶達的影響.方法 將重組質粒E2F-1-siRNA轉染MGC803細胞,篩選穩定株,利用RT-PCR檢測轉染前後細胞E2F-1 mRNA錶達水平,併通過蛋白免疫印記法(Western blot)檢測各組細胞E2F-1蛋白的錶達水平來驗證質粒轉入胃癌細胞的情況.採用Western blot檢測三組細胞中總Rb蛋白和燐痠化Rb蛋白的錶達情況,計算齣非燐痠化Rb蛋白錶達情況,統計各組間的差異.結果 重組質粒E2F-1-siRNA成功轉入胃癌細胞中;有效抑製瞭E2F-1 mRNA的錶達,E2F-1蛋白水平顯著下降,與陰性對照組及未轉染組相比分彆降低瞭83.2%和84.6%,去燐痠化Rb蛋白分彆增加瞭61.22%(P<0.05)和66.60%(P<0.05),差異有統計學意義.結論 沉默錶達E2F-1基因後,可以有效降低Rb蛋白的水平,促進其活化形式去燐痠化Rb蛋白的產生.
목적 응용RNA간우기술연구E2F-1기인침묵재인위암MGC803세포중대Rb단백표체적영향.방법 장중조질립E2F-1-siRNA전염MGC803세포,사선은정주,이용RT-PCR검측전염전후세포E2F-1 mRNA표체수평,병통과단백면역인기법(Western blot)검측각조세포E2F-1단백적표체수평래험증질립전입위암세포적정황.채용Western blot검측삼조세포중총Rb단백화린산화Rb단백적표체정황,계산출비린산화Rb단백표체정황,통계각조간적차이.결과 중조질립E2F-1-siRNA성공전입위암세포중;유효억제료E2F-1 mRNA적표체,E2F-1단백수평현저하강,여음성대조조급미전염조상비분별강저료83.2%화84.6%,거린산화Rb단백분별증가료61.22%(P<0.05)화66.60%(P<0.05),차이유통계학의의.결론 침묵표체E2F-1기인후,가이유효강저Rb단백적수평,촉진기활화형식거린산화Rb단백적산생.
