色谱
色譜
색보
CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2012年
8期
851-855
,共5页
阴离子交换色谱%分子排阻色谱%免疫球蛋白%白蛋白%动物血清%纯化
陰離子交換色譜%分子排阻色譜%免疫毬蛋白%白蛋白%動物血清%純化
음리자교환색보%분자배조색보%면역구단백%백단백%동물혈청%순화
动物血清中免疫球蛋白和白蛋白的等电点分别约为7.8和4.8,根据它们等电点的较大差别,利用Q SepharoseTM-xL强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱同时分离纯化这2种蛋白.以0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液平衡离子交换色谱柱并将已稀释10倍的高免疫的兔血清上样,采用pH分段洗脱.在pH 6.0时以0.3mL/min低流速洗脱得到高纯度的免疫球蛋白,继续在pH 4.0时洗脱,再辅以Sephadex G-75分子排阻色谱可获得纯度大于95％的白蛋白.对纯化后的蛋白进行活性检测,证明所纯化的免疫球蛋白和白蛋白都保持正常的生物活性.蛋白质含量测定说明免疫球蛋白的纯化回收率达到95％以上,而白蛋白的纯化回收率大于90％.该法简便快速,可同时从动物血清中纯化出保持生物活性的免疫球蛋白和白蛋白,纯化效率高.
動物血清中免疫毬蛋白和白蛋白的等電點分彆約為7.8和4.8,根據它們等電點的較大差彆,利用Q SepharoseTM-xL彊陰離子交換色譜結閤分子排阻色譜同時分離純化這2種蛋白.以0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl緩遲液平衡離子交換色譜柱併將已稀釋10倍的高免疫的兔血清上樣,採用pH分段洗脫.在pH 6.0時以0.3mL/min低流速洗脫得到高純度的免疫毬蛋白,繼續在pH 4.0時洗脫,再輔以Sephadex G-75分子排阻色譜可穫得純度大于95％的白蛋白.對純化後的蛋白進行活性檢測,證明所純化的免疫毬蛋白和白蛋白都保持正常的生物活性.蛋白質含量測定說明免疫毬蛋白的純化迴收率達到95％以上,而白蛋白的純化迴收率大于90％.該法簡便快速,可同時從動物血清中純化齣保持生物活性的免疫毬蛋白和白蛋白,純化效率高.
동물혈청중면역구단백화백단백적등전점분별약위7.8화4.8,근거타문등전점적교대차별,이용Q SepharoseTM-xL강음리자교환색보결합분자배조색보동시분리순화저2충단백.이0.02 mol/L pH 8.0적Tris-HCl완충액평형리자교환색보주병장이희석10배적고면역적토혈청상양,채용pH분단세탈.재pH 6.0시이0.3mL/min저류속세탈득도고순도적면역구단백,계속재pH 4.0시세탈,재보이Sephadex G-75분자배조색보가획득순도대우95％적백단백.대순화후적단백진행활성검측,증명소순화적면역구단백화백단백도보지정상적생물활성.단백질함량측정설명면역구단백적순화회수솔체도95％이상,이백단백적순화회수솔대우90％.해법간편쾌속,가동시종동물혈청중순화출보지생물활성적면역구단백화백단백,순화효솔고.
