针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较
침대S기인적siRNA혹shRNA표체광대HepG2.2.15세포중HBV기인표체화병독복제적억제작용비교
Inhibition of HBV gene expression and replication in HepG2.2.15 cells by siRNA or shRNA expressing cassettes targeting HBV S gene
  • 万方数据
    中华微生物学和免疫学杂志 중화미생물학화면역학잡지
    CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
    2007年 4期 353-357 ,共5页

    温伟红%刘家云%王凯%薛茜%孟艳玲%赵晶%贾林涛%薛采芳%王成济%杨安钢

    온위홍%류가운%왕개%설천%맹염령%조정%가림도%설채방%왕성제%양안강

    乙型肝炎病毒%RNA干扰%shRNA表达框%siRNA 乙型肝炎病毒%RNA榦擾%shRNA錶達框%siRNA
    을형간염병독%RNA간우%shRNA표체광%siRNA
    目的 化学合成针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA,同时制备针对相同区段的shRNA表达框,并比较二者对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用.方法 化学合成针对HBV S基因的带有FITC标记的siRNA,设计合成带有FITC标记的引物,PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框,并对扩增产物进行纯化,将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞,转染1 d后流式细胞仪检测转染效率,转染3 d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平,用SDS-PAGE、Western blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达.收集转染前和转染后1、3、5和7 d的细胞培养上清,检测HBsAg水平,同时用荧光定量PCR方法检测HBV DNA的含量.结果 成功制备了针对HBV S基因的shRNA表达框,将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2.2.15细胞后,RT-PCR证实细胞中HBV mRNA水平降低,SDS-PAGE、Western blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制,细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降.与siRNA相比,shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢,但持续时间更长.结论 shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达,与siRNA相比,shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达.
    목적 화학합성침대을형간염병독(HBV)S기인적siRNA,동시제비침대상동구단적shRNA표체광,병비교이자대HepG2.2.15세포중HBV기인표체화병독복제적억제작용.방법 화학합성침대HBV S기인적대유FITC표기적siRNA,설계합성대유FITC표기적인물,PCR확증함유RNA취합매Ⅲ계동자H1서렬화shRNA편마서렬적표체광,병대확증산물진행순화,장등마이수siRNA화shRNA표체광분별용지질체전염은정표체HBV적HepG2.2.15세포,전염1 d후류식세포의검측전염효솔,전염3 d후RT-PCR검측파기인mRNA적수평,용SDS-PAGE、Western blot급간접면역형광염색검측HBsAg적표체.수집전염전화전염후1、3、5화7 d적세포배양상청,검측HBsAg수평,동시용형광정량PCR방법검측HBV DNA적함량.결과 성공제비료침대HBV S기인적shRNA표체광,장기여등마이수siRNA분별전염HepG2.2.15세포후,RT-PCR증실세포중HBV mRNA수평강저,SDS-PAGE、Western blot급간접면역형광염색검측도HBsAg적표체수도억제,세포배양상청중HBsAg화HBV DNA함량하강.여siRNA상비,shRNA표체광대HBV적억제작용수연기효교만,단지속시간경장.결론 shRNA표체광화siRNA균가명현억제HBV적전록화표체,여siRNA상비,shRNA표체광능구경지구지억제파기인적표체.
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