第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
10期
1095-1098
,共4页
张弛%王梁华%罗以勤%张兴群%高云%史薇%包晨颖%球谊%焦炳华
張弛%王樑華%囉以勤%張興群%高雲%史薇%包晨穎%毬誼%焦炳華
장이%왕량화%라이근%장흥군%고운%사미%포신영%구의%초병화
细菌双杂交系统%细胞外蛋白质%TNF相关凋亡诱导配体%DR4%DR5%DcR1%DcR2%OPG
細菌雙雜交繫統%細胞外蛋白質%TNF相關凋亡誘導配體%DR4%DR5%DcR1%DcR2%OPG
세균쌍잡교계통%세포외단백질%TNF상관조망유도배체%DR4%DR5%DcR1%DcR2%OPG
目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性.方法:应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒.重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标.结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500 μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG 组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250 μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆.对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal11 4组共转化后呈阴性.结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究.
目的:探索應用細菌雙雜交繫統在細胞外蛋白質之間相互作用的可行性.方法:應用Stratagene BacterioMatch two hybrid system,以pTRG構建編碼TRAIL細胞外可溶性區域序列融閤錶達質粒;以pBT構建編碼DR4、DR5、OPG等的細胞外區域序列融閤錶達質粒.重組質粒分彆相應共轉化報告菌株XL1-Blue MRF,報道基因產物以抗羧芐青黴素和β-半乳糖苷酶活性作為轉錄激活的指標.結果:pTRG-TRAIL與pBT-DR4,pTRG-TRAIL與pBT-DR5及對照組分彆共轉化後在高濃度羧芐青黴素(500 μg/ml以上)篩選下宿主菌呈轉錄激活狀態,pTRG-TRAIL與pBT-OPG 組共轉化後在低濃度羧芐青黴素(250 μg/ml以下)篩選下宿主菌呈轉錄激活狀態,用X-Gal-PETG平皿可以進一步驗證暘性剋隆.對照組pTRG-TRAIL與pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG與pTRG-Gal11 4組共轉化後呈陰性.結論:所用的雙雜交序列皆為編碼這些蛋白質的細胞外區域,而這些蛋白質本身的相互作用已有其他報道驗證,所以細菌雙雜交繫統可以用于細胞外蛋白質的相互作用研究.
목적:탐색응용세균쌍잡교계통재세포외단백질지간상호작용적가행성.방법:응용Stratagene BacterioMatch two hybrid system,이pTRG구건편마TRAIL세포외가용성구역서렬융합표체질립;이pBT구건편마DR4、DR5、OPG등적세포외구역서렬융합표체질립.중조질립분별상응공전화보고균주XL1-Blue MRF,보도기인산물이항최변청매소화β-반유당감매활성작위전록격활적지표.결과:pTRG-TRAIL여pBT-DR4,pTRG-TRAIL여pBT-DR5급대조조분별공전화후재고농도최변청매소(500 μg/ml이상)사선하숙주균정전록격활상태,pTRG-TRAIL여pBT-OPG 조공전화후재저농도최변청매소(250 μg/ml이하)사선하숙주균정전록격활상태,용X-Gal-PETG평명가이진일보험증양성극륭.대조조pTRG-TRAIL여pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5혹pBT-OPG여pTRG-Gal11 4조공전화후정음성.결론:소용적쌍잡교서렬개위편마저사단백질적세포외구역,이저사단백질본신적상호작용이유기타보도험증,소이세균쌍잡교계통가이용우세포외단백질적상호작용연구.
