目的在探讨稀土与肿瘤关系的基础上进一步证明稀土的抑癌作用及探讨作用机制,最终的目标是为稀土在医药保健事业方面开创一个新领域.提供确定、可靠的科学依据.方法通过动物实验及细胞培养,采用生化、免疫、分子生物学等方面的规范方法及高新技术的应用,如用电子顺磁共振(FSR)自旋扑获技术测定自由基、Northern杂交技术分析稀土元素对抑癌基因的表达等.此外,还对接触稀土人群进行了10年的动态观察和肿瘤流行病学回顾性的队列调查等.结果①整体抑癌实验:按卫生部颁发的药效实验规程,给小鼠腋下种瘤株,腹腔注射ReNO3、ReCl3等,剂量在32及64 mg/kg时对S180肉瘤生长的抑制率分别为39.87%及27.34%、Lewis肺癌生长抑制率分别为36.82%及29.55%均有明显的统计学意义.给AMAE小鼠腹腔注射氨基甲酸乙酯的肺癌剂同时饮用ReCl3(0.062 5%、0.25%、1.0%)120 d时其肿瘤发生率分别为75%、61.8%、79.6%,而未给稀土组为90.0%,表明稀土对化学致肺腺癌小鼠亦具有明显抑制作用.②体外抑癌试验:对人白血病细胞(K562)在ReNO3浓度为0.032～0.5 mg/ml时,生长的抑制率为15.8%～34%,在ReCl3浓度为0.01～0.5 mmol/L时其细胞生长抑制率为18%～68%,而对正常人羊膜细胞(FL)起促生长作用;对胃癌细胞(PAMC82)经ReCl31 mmol/L处理14～28 d时,其细胞形态发生明显变化,用免疫荧光染色观察细胞骨架微管和微丝的结构,多数癌细胞内出现近似正常细胞的微管网架;PAMC82细胞在软琼脂中生长良好,经ReCl3处理后,细胞生长极慢,平均每皿集落数由18.7降至4.以上结果表明,癌细胞经稀土处理后,其恶性程度降低,分化程度升高.③抑癌机制研究:从免疫、生化及分子生物学等方面探讨其作用机制.A对正常小鼠腹腔隔日注射(共5次)的ReNO3(32 mg/kg)及给化学致癌剂(氨基甲酸乙酯)后饮ReCl3水溶液120 d的小鼠,取其脾脏测定NK细胞活力(%).结果均有明显激活作用.B.采用Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)培养及孔雀绿显色法,以ReNO3浓度为16～250 μg/ml与MΦ培养,测得其吞噬强度范围(1.12～1.35),明显地高于非稀土培养的吞噬强度(0.88),表明稀土有促进巨噬细胞特异的吞噬功能.C利用电子顺磁共振技术EPR 300型波谱仪测得20 mg温石棉在磷酸盐缓冲液中产生的羟自由基(*OH)信号谱峰高为4.6 cm,当其分别给与2～20 mg ReCl3或ReNO3混合后,产生的*OH信号几乎消失或明显减弱;经温石棉诱导,用ReCl3处理的肺巨噬细胞,其*OH强度和超氧阴离子(O-*)2)的浓度明显受抑制;经氨基甲酸乙酯诱癌的小鼠,饮ReCl3溶液120 d后,其体内超氧化物歧化酶(SOD)显著高于未饮稀土组,脂质过氧化物代谢产物丙二醛(MDA)明显低于饮稀土组.以上结果表明稀土可抑制温石棉产生*OH和O-)/(*)2,增强SOD活性,降低膜脂质过氧化.D对肿瘤相关基因表达的研究;用Northern杂交分析方法,结果表明:抑癌基因P53和P21表达水平低下的人胃癌细胞PAMC82,经1.5 mmol/L laCl3或0.75 mmol/L的CaeCl3(ReCl3)处理后,其P53和P16基因表达明显增强;而变化最明显的是抑癌基因P21的表达.④肿瘤流行病学调查:对我国最大的甘肃稀土公司,进行了肿瘤回顾性的队列调查,其结果稀土组和对照组死亡率分别为19.675 2/105和87.948 4/105,RR为0.223 7(P＜0.05),稀土组和对照组的肺癌死亡率分别为0/105与40.923 0/105(P＜0.05),此结果表明稀土有控制肿瘤发生的趋势.结论从微观到宏观,从动物实验到人群流调,均证明了稀土有抑癌作用.从抑癌机制的研究表明,经稀土处理的人胃癌细胞P21、P16、P53的基因表达均有明显增强,提示其抑癌作用可能是通过稀土使癌细胞恶性程度降低,分化程度升高,增强抑癌基因表达实现的.还表明稀土在直接作用于细胞的同时,还能改善和提高机体的抗肿瘤免疫及清除体内垃圾的抗氧化功能等方面的综合性防癌作用.
目的在探討稀土與腫瘤關繫的基礎上進一步證明稀土的抑癌作用及探討作用機製,最終的目標是為稀土在醫藥保健事業方麵開創一箇新領域.提供確定、可靠的科學依據.方法通過動物實驗及細胞培養,採用生化、免疫、分子生物學等方麵的規範方法及高新技術的應用,如用電子順磁共振(FSR)自鏇撲穫技術測定自由基、Northern雜交技術分析稀土元素對抑癌基因的錶達等.此外,還對接觸稀土人群進行瞭10年的動態觀察和腫瘤流行病學迴顧性的隊列調查等.結果①整體抑癌實驗:按衛生部頒髮的藥效實驗規程,給小鼠腋下種瘤株,腹腔註射ReNO3、ReCl3等,劑量在32及64 mg/kg時對S180肉瘤生長的抑製率分彆為39.87%及27.34%、Lewis肺癌生長抑製率分彆為36.82%及29.55%均有明顯的統計學意義.給AMAE小鼠腹腔註射氨基甲痠乙酯的肺癌劑同時飲用ReCl3(0.062 5%、0.25%、1.0%)120 d時其腫瘤髮生率分彆為75%、61.8%、79.6%,而未給稀土組為90.0%,錶明稀土對化學緻肺腺癌小鼠亦具有明顯抑製作用.②體外抑癌試驗:對人白血病細胞(K562)在ReNO3濃度為0.032～0.5 mg/ml時,生長的抑製率為15.8%～34%,在ReCl3濃度為0.01～0.5 mmol/L時其細胞生長抑製率為18%～68%,而對正常人羊膜細胞(FL)起促生長作用;對胃癌細胞(PAMC82)經ReCl31 mmol/L處理14～28 d時,其細胞形態髮生明顯變化,用免疫熒光染色觀察細胞骨架微管和微絲的結構,多數癌細胞內齣現近似正常細胞的微管網架;PAMC82細胞在軟瓊脂中生長良好,經ReCl3處理後,細胞生長極慢,平均每皿集落數由18.7降至4.以上結果錶明,癌細胞經稀土處理後,其噁性程度降低,分化程度升高.③抑癌機製研究:從免疫、生化及分子生物學等方麵探討其作用機製.A對正常小鼠腹腔隔日註射(共5次)的ReNO3(32 mg/kg)及給化學緻癌劑(氨基甲痠乙酯)後飲ReCl3水溶液120 d的小鼠,取其脾髒測定NK細胞活力(%).結果均有明顯激活作用.B.採用Balb/c小鼠腹腔巨噬細胞(MΦ)培養及孔雀綠顯色法,以ReNO3濃度為16～250 μg/ml與MΦ培養,測得其吞噬彊度範圍(1.12～1.35),明顯地高于非稀土培養的吞噬彊度(0.88),錶明稀土有促進巨噬細胞特異的吞噬功能.C利用電子順磁共振技術EPR 300型波譜儀測得20 mg溫石棉在燐痠鹽緩遲液中產生的羥自由基(*OH)信號譜峰高為4.6 cm,噹其分彆給與2～20 mg ReCl3或ReNO3混閤後,產生的*OH信號幾乎消失或明顯減弱;經溫石棉誘導,用ReCl3處理的肺巨噬細胞,其*OH彊度和超氧陰離子(O-*)2)的濃度明顯受抑製;經氨基甲痠乙酯誘癌的小鼠,飲ReCl3溶液120 d後,其體內超氧化物歧化酶(SOD)顯著高于未飲稀土組,脂質過氧化物代謝產物丙二醛(MDA)明顯低于飲稀土組.以上結果錶明稀土可抑製溫石棉產生*OH和O-)/(*)2,增彊SOD活性,降低膜脂質過氧化.D對腫瘤相關基因錶達的研究;用Northern雜交分析方法,結果錶明:抑癌基因P53和P21錶達水平低下的人胃癌細胞PAMC82,經1.5 mmol/L laCl3或0.75 mmol/L的CaeCl3(ReCl3)處理後,其P53和P16基因錶達明顯增彊;而變化最明顯的是抑癌基因P21的錶達.④腫瘤流行病學調查:對我國最大的甘肅稀土公司,進行瞭腫瘤迴顧性的隊列調查,其結果稀土組和對照組死亡率分彆為19.675 2/105和87.948 4/105,RR為0.223 7(P＜0.05),稀土組和對照組的肺癌死亡率分彆為0/105與40.923 0/105(P＜0.05),此結果錶明稀土有控製腫瘤髮生的趨勢.結論從微觀到宏觀,從動物實驗到人群流調,均證明瞭稀土有抑癌作用.從抑癌機製的研究錶明,經稀土處理的人胃癌細胞P21、P16、P53的基因錶達均有明顯增彊,提示其抑癌作用可能是通過稀土使癌細胞噁性程度降低,分化程度升高,增彊抑癌基因錶達實現的.還錶明稀土在直接作用于細胞的同時,還能改善和提高機體的抗腫瘤免疫及清除體內垃圾的抗氧化功能等方麵的綜閤性防癌作用.
목적재탐토희토여종류관계적기출상진일보증명희토적억암작용급탐토작용궤제,최종적목표시위희토재의약보건사업방면개창일개신영역.제공학정、가고적과학의거.방법통과동물실험급세포배양,채용생화、면역、분자생물학등방면적규범방법급고신기술적응용,여용전자순자공진(FSR)자선복획기술측정자유기、Northern잡교기술분석희토원소대억암기인적표체등.차외,환대접촉희토인군진행료10년적동태관찰화종류류행병학회고성적대렬조사등.결과①정체억암실험:안위생부반발적약효실험규정,급소서액하충류주,복강주사ReNO3、ReCl3등,제량재32급64 mg/kg시대S180육류생장적억제솔분별위39.87%급27.34%、Lewis폐암생장억제솔분별위36.82%급29.55%균유명현적통계학의의.급AMAE소서복강주사안기갑산을지적폐암제동시음용ReCl3(0.062 5%、0.25%、1.0%)120 d시기종류발생솔분별위75%、61.8%、79.6%,이미급희토조위90.0%,표명희토대화학치폐선암소서역구유명현억제작용.②체외억암시험:대인백혈병세포(K562)재ReNO3농도위0.032～0.5 mg/ml시,생장적억제솔위15.8%～34%,재ReCl3농도위0.01～0.5 mmol/L시기세포생장억제솔위18%～68%,이대정상인양막세포(FL)기촉생장작용;대위암세포(PAMC82)경ReCl31 mmol/L처리14～28 d시,기세포형태발생명현변화,용면역형광염색관찰세포골가미관화미사적결구,다수암세포내출현근사정상세포적미관망가;PAMC82세포재연경지중생장량호,경ReCl3처리후,세포생장겁만,평균매명집락수유18.7강지4.이상결과표명,암세포경희토처리후,기악성정도강저,분화정도승고.③억암궤제연구:종면역、생화급분자생물학등방면탐토기작용궤제.A대정상소서복강격일주사(공5차)적ReNO3(32 mg/kg)급급화학치암제(안기갑산을지)후음ReCl3수용액120 d적소서,취기비장측정NK세포활력(%).결과균유명현격활작용.B.채용Balb/c소서복강거서세포(MΦ)배양급공작록현색법,이ReNO3농도위16～250 μg/ml여MΦ배양,측득기탄서강도범위(1.12～1.35),명현지고우비희토배양적탄서강도(0.88),표명희토유촉진거서세포특이적탄서공능.C이용전자순자공진기술EPR 300형파보의측득20 mg온석면재린산염완충액중산생적간자유기(*OH)신호보봉고위4.6 cm,당기분별급여2～20 mg ReCl3혹ReNO3혼합후,산생적*OH신호궤호소실혹명현감약;경온석면유도,용ReCl3처리적폐거서세포,기*OH강도화초양음리자(O-*)2)적농도명현수억제;경안기갑산을지유암적소서,음ReCl3용액120 d후,기체내초양화물기화매(SOD)현저고우미음희토조,지질과양화물대사산물병이철(MDA)명현저우음희토조.이상결과표명희토가억제온석면산생*OH화O-)/(*)2,증강SOD활성,강저막지질과양화.D대종류상관기인표체적연구;용Northern잡교분석방법,결과표명:억암기인P53화P21표체수평저하적인위암세포PAMC82,경1.5 mmol/L laCl3혹0.75 mmol/L적CaeCl3(ReCl3)처리후,기P53화P16기인표체명현증강;이변화최명현적시억암기인P21적표체.④종류류행병학조사:대아국최대적감숙희토공사,진행료종류회고성적대렬조사,기결과희토조화대조조사망솔분별위19.675 2/105화87.948 4/105,RR위0.223 7(P＜0.05),희토조화대조조적폐암사망솔분별위0/105여40.923 0/105(P＜0.05),차결과표명희토유공제종류발생적추세.결론종미관도굉관,종동물실험도인군류조,균증명료희토유억암작용.종억암궤제적연구표명,경희토처리적인위암세포P21、P16、P53적기인표체균유명현증강,제시기억암작용가능시통과희토사암세포악성정도강저,분화정도승고,증강억암기인표체실현적.환표명희토재직접작용우세포적동시,환능개선화제고궤체적항종류면역급청제체내랄급적항양화공능등방면적종합성방암작용.
