CAJ | 학술논문

应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母,用以检测类,抗雌激素化合物和环境样品的类,抗雌激素活性.采用多聚酶链反应(PCR)法扩增人雌激素受体(hER)基因,构建诱饵质粒pGBKT7-ER LBD;分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的靶质粒pGAD424-GRIP1和pGAD424-SRC1;诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187,于营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)上筛选阳性菌落,分别构建两种ER双杂交酵母ER+GRIP1和ER+SRC1.考察双杂交酵母与不同激素:17β-雌二醇(E2)、二氢睾酮(DHT)、孕酮(PG)以及三碘甲状腺原氨酸(T3)的结合情况,并考察了雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬(4-OHT)与酵母的相互作用.结果表明:ER+GRIP1和ER+SRC1酵母均能够专一性的和E2结合,并存在显著的剂量-效应关系,E2对ER+GRIPl和ER+SRC1酵母β-半乳糖苷酶活性诱导的EC50值分别为7.3×10-11mol·L-1和1.5×10-10mol·L-1,其中ER+GRIP1酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于ER+SRC1酵母细胞.4-OHT能够抑制E2诱导ER+GRIP1酵母细胞产生的酶活性,并存在显著的剂量-效应关系,IC50值为1.0×10-7.mol·L-1.表明重组人雌激素受体基因酵母可以用于检测化合物和环境样品的类/抗雌激素活性.
응용효모쌍잡교기술구건중조인자격소수체기인효모,용이검측류,항자격소화합물화배경양품적류,항자격소활성.채용다취매련반응(PCR)법확증인자격소수체(hER)기인,구건유이질립pGBKT7-ER LBD;분별제취병순화량충함유ER공격활인자기인적파질립pGAD424-GRIP1화pGAD424-SRC1;유이질립화파질립동시전염효모세포Y187,우영양결함형배양기(SD/-Trp/-Leu)상사선양성균락,분별구건량충ER쌍잡교효모ER+GRIP1화ER+SRC1.고찰쌍잡교효모여불동격소:17β-자이순(E2)、이경고동(DHT)、잉동(PG)이급삼전갑상선원안산(T3)적결합정황,병고찰료자격소수체길항제4-간기타막석분(4-OHT)여효모적상호작용.결과표명:ER+GRIP1화ER+SRC1효모균능구전일성적화E2결합,병존재현저적제량-효응관계,E2대ER+GRIPl화ER+SRC1효모β-반유당감매활성유도적EC50치분별위7.3×10-11mol·L-1화1.5×10-10mol·L-1,기중ER+GRIP1효모세포유도산생적매활성치명현고우ER+SRC1효모세포.4-OHT능구억제E2유도ER+GRIP1효모세포산생적매활성,병존재현저적제량-효응관계,IC50치위1.0×10-7.mol·L-1.표명중조인자격소수체기인효모가이용우검측화합물화배경양품적류/항자격소활성.