CAJ | 학술논문

[目的]探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)的表达对肝癌细胞侵袭能力的影响.[方法]设计、合成4对针对PRL-3基因siRNA的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T细胞,据其对PRL-3的抑制率,筛选最有效的PRL-3基因RNAi靶序列,设计并合成其siRNA的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-SiRNA.并行PCR和测序鉴定.将LV-PRL3-SiRNA,pHelper 1.0和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平经孔稀释法测定病毒滴度.重组慢病毒感染肝癌SMCC7721细胞,行real time-PCR和western-blot验证PRL-3基因的沉默效果.用Transwell侵袭试验检测SMCC7721细胞体外侵袭力的改变.[结果]成功构建PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6×108Tu/mL.和对照组相比,RNA干扰组SMMC7721细胞PRL-3基因的mRNA水平和蛋白水平的抑制率分别为75%和63%;其穿过人工基底膜的平均数(14.2±0.8)明显少于空白对照组(33.0±1.6)及非特异性siRNA感染组(31.2±0.8),侵袭抑制率为58%(P＜0.01).[结论]降低PRL-3的表达可抑制肝癌细胞的侵袭能力.
[목적]탐토간재생린산매-3(PRL-3)적표체대간암세포침습능력적영향.[방법]설계、합성4대침대PRL-3기인siRNA적과핵감산서렬,분별구건질립,전염293T세포,거기대PRL-3적억제솔,사선최유효적PRL-3기인RNAi파서렬,설계병합성기siRNA적쌍련DNA Oligo,여함록색형광단백(GFP)편마기인적pGCL-GFP선성화재체련접산생중조만병독질립LV-PRL3-SiRNA.병행PCR화측서감정.장LV-PRL3-SiRNA,pHelper 1.0화pHelper 2.0삼충질립DNA공전염293T세포,포장산생만병독,이293T세포GFP단백적표체수평경공희석법측정병독적도.중조만병독감염간암SMCC7721세포,행real time-PCR화western-blot험증PRL-3기인적침묵효과.용Transwell침습시험검측SMCC7721세포체외침습력적개변.[결과]성공구건PRL-3기인RNA간우만병독재체병획득상응적만병독,농축병독현액적적도위6×108Tu/mL.화대조조상비,RNA간우조SMMC7721세포PRL-3기인적mRNA수평화단백수평적억제솔분별위75%화63%;기천과인공기저막적평균수(14.2±0.8)명현소우공백대조조(33.0±1.6)급비특이성siRNA감염조(31.2±0.8),침습억제솔위58%(P＜0.01).[결론]강저PRL-3적표체가억제간암세포적침습능력.