华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
3期
85-89
,共5页
锰超氧化物歧化酶%表达%纯化%SOD活性
錳超氧化物歧化酶%錶達%純化%SOD活性
맹초양화물기화매%표체%순화%SOD활성
为构建小鼠锰超氧化物歧化酶(SOD)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测,以小鼠肝脏cDNA为模板,利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因,PCR扩增了1个长600 bp左右的基因片段,该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋白.将其插入pET15b载体中,经测序鉴定正确后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami.含有pET15b-mMn-SOD质粒的工程菌经过IPTG诱导能表达出相对分子质量约25000的目的蛋白,超声破碎菌体,经Ni-NTA纯化后得到纯度约为95%的重组mMn-SOD蛋白.SOD活性检测表明经过诱导表达的mMn-SOD比活力为531.7 U/mg.
為構建小鼠錳超氧化物歧化酶(SOD)的原覈錶達載體,在大腸桿菌中進行蛋白錶達、純化和功能檢測,以小鼠肝髒cDNA為模闆,利用PCR方法剋隆小鼠錳SOD基因,PCR擴增瞭1箇長600 bp左右的基因片段,該片段編碼由198箇氨基痠組成的成熟的小鼠錳SOD蛋白.將其插入pET15b載體中,經測序鑒定正確後,將重組質粒轉化大腸桿菌Rosetta-gami.含有pET15b-mMn-SOD質粒的工程菌經過IPTG誘導能錶達齣相對分子質量約25000的目的蛋白,超聲破碎菌體,經Ni-NTA純化後得到純度約為95%的重組mMn-SOD蛋白.SOD活性檢測錶明經過誘導錶達的mMn-SOD比活力為531.7 U/mg.
위구건소서맹초양화물기화매(SOD)적원핵표체재체,재대장간균중진행단백표체、순화화공능검측,이소서간장cDNA위모판,이용PCR방법극륭소서맹SOD기인,PCR확증료1개장600 bp좌우적기인편단,해편단편마유198개안기산조성적성숙적소서맹SOD단백.장기삽입pET15b재체중,경측서감정정학후,장중조질립전화대장간균Rosetta-gami.함유pET15b-mMn-SOD질립적공정균경과IPTG유도능표체출상대분자질량약25000적목적단백,초성파쇄균체,경Ni-NTA순화후득도순도약위95%적중조mMn-SOD단백.SOD활성검측표명경과유도표체적mMn-SOD비활력위531.7 U/mg.
