猪附红细胞体ORF4基因片段的人工合成及基因表达
저부홍세포체ORF4기인편단적인공합성급기인표체
Cloning and expressing of synthesis fragment of Mycoplasma suis ORF4 gene
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2011年 4期 287-290 ,共4页

    周栋%陈甜甜%刘建柱%成子强%张利%刘海涛%张璐%刘永夏%柴同杰

    주동%진첨첨%류건주%성자강%장리%류해도%장로%류영하%시동걸

    猪附红细胞体%ORF4%全基因合成%表达 豬附紅細胞體%ORF4%全基因閤成%錶達
    저부홍세포체%ORF4%전기인합성%표체
    目的 本研究通过人工合成猪附红细胞体ORF4基因,使其在大肠杆菌中高效表达.方法 选择GenBank注册的AJ504999序列的ORF4基因,应用Graphical Codon Usage Analyser选择大肠杆菌偏爱的密码子,改变基因的transl_table,设计并合成3对寡核苷酸链,用PCR-based accurate synthesis(PAS)法进行人工合成.经测序正确后,连接到表达载体PET28a,获得重组表达质粒PET28a/ORF4,导入大肠杆菌BL21(DE3),在30℃,IPTG终浓度1mmol/L的条件下诱导表达,经SDS-PAGE分析,在11 kDa附近出现目的片段.结果 结果表明ORF4基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达,通过生物信息学软件分析表明,该蛋白存在19个配基结合位点;在21～22位氨基酸可能存在信号肽裂解位点;为胞内蛋白,没有糖基化位点.结论 ORF4基因能够在大肠杆菌中表达,推测其在M.suis蛋白质的形成,M.suis的生物功能方面有着重要的作用.
    목적 본연구통과인공합성저부홍세포체ORF4기인,사기재대장간균중고효표체.방법 선택GenBank주책적AJ504999서렬적ORF4기인,응용Graphical Codon Usage Analyser선택대장간균편애적밀마자,개변기인적transl_table,설계병합성3대과핵감산련,용PCR-based accurate synthesis(PAS)법진행인공합성.경측서정학후,련접도표체재체PET28a,획득중조표체질립PET28a/ORF4,도입대장간균BL21(DE3),재30℃,IPTG종농도1mmol/L적조건하유도표체,경SDS-PAGE분석,재11 kDa부근출현목적편단.결과 결과표명ORF4기인재대장간균중능구득도고효적표체,통과생물신식학연건분석표명,해단백존재19개배기결합위점;재21～22위안기산가능존재신호태렬해위점;위포내단백,몰유당기화위점.결론 ORF4기인능구재대장간균중표체,추측기재M.suis단백질적형성,M.suis적생물공능방면유착중요적작용.
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